[發明專利]三聯真菌毒素膠體金免疫層析試紙及制備方法

在審

• 申請號: 201910023101.3
• 申請日: 2019-01-10
• 公開（公告）號: CN109765375A
• 公開（公告）日: 2019-05-17
• 發明（設計）人: 張海彬;魯希;吳文達
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/543;G01N33/569
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 陳風平

本發明公開了一種三聯真菌毒素膠體金免疫層析試紙，包括按照樣品流動方向依次連接的樣品墊、標記墊、基膜以及吸水墊；所述標記墊包括第一金墊與第二金墊，所述第一金墊至少包含有納米金標記的第一抗體；所述第二金墊至少包含納米金標記的第二抗體；所述第一金墊或第二金墊上包含有納米金標記的第三抗體；所述基膜上沿著與樣品流動的相反方向依次設置有控制線、第一檢測線、第二檢測線以及第三檢測線。本發明提供了可以同時檢測三種真菌毒素的免疫層析試紙條，達到簡單、快速、靈敏度高的現場檢測的需求，為基層AFB₁、T?2、DON三種真菌毒素快速檢測和大量樣品的篩查提供方法。

技術領域

本發明涉及一種免疫檢測試紙條及制備方法，特別涉及一種三聯真菌毒素膠體金免疫層析試紙及制備方法。

背景技術

真菌毒素(Mycotoxins)是真菌在生長過程中產生的低分子量的次級代謝產物，廣泛存在于谷物和飼料中，嚴重影響人和動物的健康。真菌毒素主要損傷動物的免疫器官、中樞神經、肝、腎和生殖器官等內臟組織。另外，有些真菌毒素具有很強的致畸、致癌、致突變作用。目前己知的真菌毒素有300多種，對人和動物危害相對較嚴重的真菌毒素有黃曲霉毒素B₁(AFB₁)、嘔吐毒素(DON)、玉米赤霉烯酮(ZEN)、煙曲霉毒素(FUM)、赭曲霉毒素A(OTA)以及T-2毒素等。

黃曲霉毒素是迄今為止己知的毒性最強的有毒物質之一，在幾種黃曲霉毒素中，毒性最強的是黃曲霉毒素B1(AFB1)，其毒性高于氰化鉀10倍，屬于特劇毒物質范疇。脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(Deoxynivalenol,DON)主要的毒性機理是通過與S60核糖體結合或抑制肽基轉移酶的活性抑制真核細胞的蛋白合成，具有急性毒性，會導致動物體重減輕，免疫力低下，還具有“三致”作用，誘發肝臟癌變等危害。T-2毒素也屬于鐮刀菌產生的單端孢霉烯族毒素，主要Fusarium sporotrichioides,Fusarium poae,and Fusarium acuminatum等鐮刀菌分泌產生，T-2急性毒性主要癥狀：嘔吐、腹瀉、低劑量的長期暴露引起炎癥反應、免疫系統紊亂、動物拒食、生長阻止、淋巴組織和腸道黏膜損傷，動物在采食這些飼料時可能會攝入多種真菌毒素，多種真菌毒素對動物健康和生產性能產生的副作用比單一毒素的危害大。

近年來，真菌毒素多重檢測方法發展迅速，如利用稀土離子Eu³⁺和Sm³⁺作為示蹤劑建立的時間分辨熒光免疫分析法(TRFIA)，可實現對嘔吐毒素和玉米赤霉烯酮的同時檢測；采用液相色譜質譜聯用法(LC-MS/MS)同時檢測谷物中多種真菌毒素以及利用超高液相色譜(UPLC)同時檢測咖啡豆中真菌毒素的混合污染等。這些方法特異性好，靈敏度較高，但操作復雜，耗時較長，無法滿足大量樣本的快速篩查。膠體金免疫層析技術由于具備快速、簡便、低成本的特點，近年來發展迅速，主要包括競爭法和雙抗體夾心法。真菌毒素屬于小分子，多采用競爭反應模式，待檢樣本陰性時，檢測線顯色，待檢樣本陽性時，檢測線不顯色。由于膠體金顆粒制備簡單且標記過程溫和，以免疫層析為基礎的多重檢測模式目前已成為食品安全檢測領域的研究熱點。

發明內容

發明目的：本發明提供了一種三聯膠體金免疫層析檢測法，在滿足方便、快捷和低成本的同時，實現對谷物和飼料中上述三種真菌毒素的同時快速檢測。

技術方案：本發明所述的一種三聯真菌毒素膠體金免疫層析試紙，包括按照樣品流動方向依次連接的樣品墊、標記墊、基膜以及吸水墊；所述標記墊包括第一金墊與第二金墊，所述第一金墊至少包含有納米金標記的第一抗體；所述第二金墊至少包含納米金標記的第二抗體；所述第一金墊或第二金墊上包含有納米金標記的第三抗體；所述基膜上沿著樣品流動的相反方向依次設置有控制線、第一檢測線、第二檢測線以及第三檢測線；所述第一檢測線包含有與第一抗體特異性結合的第一抗原；所述第二檢測線包含有與第二抗體特異性結合的第二抗原；所述第三檢測線包含有與第三抗體特異性結合的第三抗原。