[發明專利]熒光探針及其制備方法

有效

• 申請號: 201910022780.2
• 申請日: 2019-01-10
• 公開（公告）號: CN111423430B
• 公開（公告）日: 2023-10-13
• 發明（設計）人: 蔣先興
• 申請（專利權）人: 中山大學
• 主分類號: C07D413/14
• 分類號: C07D413/14;C07D413/04;C07D498/10;C09K11/06
• 代理公司: 北京律誠同業知識產權代理有限公司 11006
• 代理人: 王玉雙;王馨儀

本發明公開了一種熒光探針及其制備方法，該制備方法包括如下步驟：將亞硝基或者羥胺基取代的芳香化合物與1,3?二烯化合物置于溶劑中，反應15分鐘至4小時；真空除去所述溶劑，再通過柱色譜方式分離得到熒光探針分子。本發明提供的熒光探針是一種能夠進行原位特異性識別的熒光探針，與現有的熒光探針相比，本發明的熒光探針分子合成所需原料成本低，制備工藝簡單，熒光發光性質穩定，信噪比高。

技術領域

本發明涉及生物化學檢測工具及其制備方法，特別涉及一種新型熒光探針分子及其合成方法。

背景技術

特定的生物分子成像為生物醫藥研究中強有力的工具之一，它可以為生物學家們提供一個奇妙的出發點去形象地推斷各種不同和復雜的生物進程中潛在的生物機制。為此，研究者們做出大量的工作去發現和擴展生物成像這類工具箱。對蛋白的標記目前主要使用熒光蛋白(比如GFP，即綠色熒光蛋白)、自標記蛋白(比如SNAP標簽)、連接酶(比如硫辛酸連接酶)和自標記標簽(比如四半胱氨酸)等方法。雖然這些方法可以實現快速標記，但是需要對靶點蛋白進行修飾，這些修飾有可能會干擾蛋白的正常結構與功能，從而對研究造成很大的影響，同時這種方法無法普遍的用于動態生物學過程中；同時這類標記工具的成本高，在標記過程中也存在著較大浪費的弊端。

近年來隨著生物正交化學的快速發展和日益完善，其正日益成為一種全新的蛋白標記方法。例如，多種含有生物正交功能基的非天然氨基酸已經被用于位點特異性的蛋白標記中。其中包括由Sharpless等人開發的一價銅離子催化的疊氮與炔基的環加成反應(Kolb H.C.；Finn.M.G.；Sharpless,Angew.Chem.Int.Ed.2001,40,2004.)；由Bertozzi等人進一步發展的不用銅催化疊氮與炔基的環加成反應(Soxon E.；Bertozzi,C.R.,Science2000,287,2007.)；以及由Bertozzi等人發展的Staudinger Ligation反應(LaughlinS.T.；Baskin J.M.；Amacher S.L.；Bertozzi,C.R.,Science 2008,320,664.)；此外，還有Fox等人發展的基于Diels-Alder環加成反應的點擊化學反應(Blackman M.L.；Royzen M.；Fox,J.M.,J.Am.Chem.Soc.2008,130,13518.)。這些都為該領域做出了極大的推進作用，但是也只有這些僅有的少數幾個方法可以滿足到生物醫學研究當中。但是這些方法無一例外的，只能通過事先在探針中引入熒光分子，才能作為探針使用，而且在使用過程中操作規程繁瑣、體系中殘留的熒光染料難以除去以及制作探針時的純化也是非常麻煩的。

因此，如何實現化學反應能夠生物正交性進行，同時具有高效“點擊”熒光開關的特點，實現“熒光關―點擊反應即開”的動作，實現人與分子的可視對話，即直接“點擊”熒光的生物正交反應是接下來化學家亟需解決的問題。同時，也是一個非常有前景的研究方向。如果在該研究領域能夠取得突破不僅可以推動化學生物學基礎研究領域的進步，而且便利于醫藥生化研究，造福人類的健康，而且還能夠提高國家醫藥研發能力，實體經濟的發展。

發明內容

本發明的目的在于提供一種熒光探針及其制備方法，使其可以高效地實現蛋白標記成像。

為了實現上述目的，本發明提供一種熒光探針，該熒光探針包括第一熒光探針分子和/或第二熒光探針分子，

該第一熒光探針分子的分子結構式為：

該第二熒光探針分子的分子結構式為：

其中，R¹為-H(氫)、-Me(甲基)、-PhCOOCH₂(亞甲基芐酯基)、-CH₂OH(羥甲基)、-Pip-Cbz(芐氧酰哌啶基)、-Pip-Boc(叔丁氧酰哌啶基)或-CH₂CH₂-(雙亞乙基)；