[發明專利]一種用于米糠脂肪酶的制備方法

有效

• 申請號: 201910020385.0
• 申請日: 2019-01-09
• 公開（公告）號: CN110004126B
• 公開（公告）日: 2021-04-02
• 發明（設計）人: 陳勁中;高國展;高艾玲;蔡昌廷;鄭新耀;蔡承佳
• 申請（專利權）人: 臺灣中油股份有限公司
• 主分類號: C12N9/20
• 分類號: C12N9/20
• 代理公司: 深圳德高智行知識產權代理事務所(普通合伙) 44696
• 代理人: 孫艷

本發明公開一種用于米糠脂肪酶的制備方法，包括：萃取步驟及純化步驟，萃取步驟中，將米糠加入酵素萃取溶液中攪拌，予以離心后得到米糠脂肪酶酵素萃取液，在純化步驟中，將米糠脂肪酶酵素萃取液，加入硫酸銨暨酒精中攪拌，得到米糠脂肪酶純化酵素沉淀。本發明的功效在于，利用硫酸銨及酒精共沉淀進行酵素純化，可以有效地提升米糠脂肪酶制備效率及縮短米糠脂肪酶生產制程，且經過放大規模驗證，證實本發明可以應用于商業化生產米糠脂肪酶。

技術領域

本發明公開一種用于米糠脂肪酶的制備方法，其包括：米糠脂肪酶的萃取及純化制程， 從而取得米糠脂肪酶純化酵素。

背景技術

目前米糠多被當作低價動物飼料使用，雖然米糠是種農業廢棄物，但其含有很多營養價 值，包括：膳食纖維、胺基酸組成均衡、脂肪酸組成均衡、玄米油、富含維生素E、富含維 生素B群及礦物質、植物固醇類、阿魏酸、γ-米糠醇。雖然米糠具有如此多元化的營養價值， 但其利用率并不高。

此外，米糠有油脂酸敗的缺點，且容易滋生微生物，所以保存不易。米糠酸敗的原因主 要來自于米糠本身含有的一種酵素作用，所述酵素稱為脂肪酶(lipase)，米糠脂肪酶主要存 在于米皮中，在未與脂肪接觸時并不會產生作用。但是當自米皮碾下成米糠后，會導致脂肪 酶與油脂發生接觸，使脂肪酶酵素活性迅速提升，并開始降解脂肪釋放出游離脂肪酸，進而 造成油脂氧化性酸敗，最終導致米糠發生酸敗變質(中國專利CN102279166A)。所以對于米 糠而言，脂肪酶的存在不利于米糠保存及后續利用。但是，脂肪酶除了可降解酯鍵釋放出脂 肪酸外，它還含有許多酵素活性，例如轉酯化活性，可用于生質柴油制程。與傳統化學反應 相比較，脂肪酶的反應條件溫和，并具有良好的受質立體選擇性(可用于藥物制備)，且對環 境友善不會造成污染，因此脂肪酶廣泛應用于食品、皮革、醫藥、飼料及清潔等工業領域中。

在工業酵素市場方面，2014年全球市場產值達42億美元，其特征在于脂肪酶約占整體 市場10％。就脂肪酶市場分析，預估2020年全球市場將達近6億美元，2015～2020年間的年 成長率可達6.5％，主要用途為清潔工業及食品工業，主要市場以亞洲最大。全球多間企業以 酵素切入工業酵素市場，使用的酵素種類以脂肪酶為主，脂肪酶相關產品的用途為生物性催 化劑及油污清潔劑，酵素來源為微生物(真菌)及油污分解菌(Bacillus sp.)。

中國專利CN103642771B揭示一種米糠脂肪酶的粗酶提取及保存方法，所述方法包括：第 一步進行米糠脫脂作用，按每1g米糠對應3mL正己烷的比例進行，混勻后震蕩(170-190rpm) 處理25至35分鐘，爾后經過充分過濾將濾渣內米糠顆粒取出，于常溫下放置4至8小時， 每1小時攪拌3至4次以使正己烷充分揮發；第二步進行脫脂米糠脂肪酶的提取，將充分干 燥的脫脂米糠顆粒，按每1g脫脂米糠對應8mL蒸餾水的比例進行，混勻后震蕩(170-190rpm) 處理25至35分鐘，再于低溫下(2-6℃)離心(2,000-4,000rpm)處理25至35分鐘后，取離心上清液即為米糠脂肪酶的粗酶提取液；最后一步進行米糠脂肪酶粗酶保存，將粗酶提 取液制成冷干粉或以含有0.5mM氯化鈣的磷酸緩沖液(50mM,pH7.0)進行保存。相較于傳統磷酸緩沖液研磨提取法，本專利使用蒸餾水震蕩法進行米糠脂肪酶的提取，所提取米糠脂 肪酶粗酶的比活性較高且純度好，所述方法操作簡單且耗時較短。然所得粗酶未進一步進行 純化以取得純度較高的脂肪酶。