[發明專利]一種黃曲霉毒素B1降解酶及其應用和檢測黃曲霉毒素B1的免疫層析試紙條

有效

• 申請號: 201910020190.6
• 申請日: 2019-01-09
• 公開（公告）號: CN109557305B
• 公開（公告）日: 2022-03-04
• 發明（設計）人: 李桂冠;李笑櫻;任鋆;郭杰;陳博
• 申請（專利權）人: 中糧集團有限公司;中糧營養健康研究院有限公司;中糧生物科技（北京）有限公司
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/535;G01N33/543;G01N33/569;C12N9/00
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 劉猛;趙青朵

本發明涉及免疫檢測技術領域，公開了一種黃曲霉毒素B1降解酶及其應用和檢測黃曲霉毒素B1的免疫層析試紙條。本發明所述黃曲霉毒素B1降解酶具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。本發明利用所述黃曲霉毒素B1降解酶特異性結合黃曲霉毒素B1的特性制作膠體金免疫層析試紙條，與黃曲霉毒素B1具有更高的親和力，靈敏度高；具有更強的特異性，與其他毒素無交叉；且受體可以體外原核表達，與抗體相比較具有產量高，周期短，成本低的優勢，且整個過程可控；免疫層析試紙條檢測黃曲霉毒素B1時無需任何其他試劑，加入處理后的樣品液后，5?10min即可獲得結果，大大提高效率，可實現黃曲霉毒素B1的現場快速檢測。

技術領域

本發明涉及免疫檢測技術領域，具體涉及一種黃曲霉毒素B1降解酶及其應用和檢測黃曲霉毒素B1的免疫層析試紙條。

背景技術

據調查發現，全球40％以上的糧食作物在儲存和運輸過程中受霉菌的影響，且霉菌在代謝過程中產生毒素。聯合國糧農組織估算全球谷物25％受霉菌毒素污染，且至少2％農作物受黃曲霉毒素污染而報廢。黃曲霉毒素是由黃曲霉和寄生曲霉產生的有毒代謝產物，在已知近百種毒素中，黃曲霉毒素是污染頻率最高，毒性最強的次生真菌毒素，1993年，世界衛生組織把黃曲霉毒素列為I類致癌物。

目前已經發現有20余種黃曲霉毒素，在受污染的農副產品中，黃曲霉毒素B1是最常見，最具代表性的一種毒素，且致癌性極強、毒性極大，給人民群眾的身體健康和消費安全帶來極大的危害。黃曲霉毒素廣泛存在于農副產品、動植物及土壤中，尤其在谷物、花生、堅果和動物飼料中經常發現。因此，對黃曲霉毒素B1進行快速有效的檢測關乎人民群眾的身體健康和食品安全。

目前對黃曲霉毒素B1檢測方法主要有酶聯免疫吸附法、免疫親和柱和熒光分光光度法及高效液相色譜法相結合、高效液相色譜和串聯質譜法相結合等，雖然這些方法檢測數據準確，分辨率高等，但是它們操作步驟繁瑣，耗時較長，對實驗人員技術要求高，且儀器價格昂貴，不適合現場快速檢測，因此急需開發快速高效、特異準備、操作簡便的黃曲霉毒素檢測方法。

膠體金免疫層析法是近年來出現的一種操作簡單快速、成本低廉，便于現場操作的檢測方法。膠體金免疫層析法利用抗原抗體特異性識別進行檢測，但是抗體制作成本高，周期長，批間差異大，不利于產品的制作。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種黃曲霉毒素B1降解酶，使其能夠特異性結合黃曲霉毒素B1，并可應用于黃曲霉毒素B1的免疫檢測中；

本發明的另外一個目的在于提供一種基于上述黃曲霉毒素B1降解酶的檢測黃曲霉毒素B1的免疫層析試紙條，使得所述試紙條能夠檢測黃曲霉毒素B1，并具備較高的特異性和靈敏度，檢測效率高，制備工藝簡單。

為了實現上述發明目的，本發明提供了如下技術方案：

一種黃曲霉毒素B1降解酶，具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。

本發明所提供的黃曲霉毒素B1降解酶可以與黃曲霉毒素特異結合，基于這種特性采用類似Elisa方法中的競爭法原理，讓黃曲霉毒素B1-膠體金標記物和待測樣品中的黃曲霉毒素B1競爭結合所述黃曲霉毒素B1降解酶，以此實現檢測黃曲霉毒素B1的目的。

基于此，本發明提供了所述黃曲霉毒素B1降解酶在檢測黃曲霉毒素B1和/或制備檢測黃曲霉毒素B1的免疫檢測產品中的應用。

在本發明具體實施方式中，所述免疫檢測產品為免疫層析試紙條，更具體地為免疫層析膠體金試紙條。

依據上述應用，本發明提供了一種檢測黃曲霉毒素B1的免疫層析試紙條，包括黃曲霉毒素B1降解酶-膠體金標記物、IgG-膠體金標記物和試紙條；所述試紙條上的檢測線包被有黃曲霉毒素B1，所述質控線包被有抗IgG抗體；所述黃曲霉毒素B1降解酶具有如SEQ IDNO:1所示的氨基酸序列。