[發(fā)明專利]一種與綿羊尾脂重相關(guān)的分子標(biāo)記及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910015108.0
• 申請(qǐng)日: 2019-01-08
• 公開（公告）號(hào): CN109694915B
• 公開（公告）日: 2022-03-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王維民;張德印;張小雪;李沖;喇永富;李國(guó)澤
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/6888
• 分類號(hào): C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 北京智為時(shí)代知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11498
• 代理人: 王加嶺;楊靜

本發(fā)明提供了一種與綿羊尾脂重相關(guān)的分子標(biāo)記，以及該分子標(biāo)記的檢測(cè)方法和應(yīng)用。本發(fā)明通過(guò)對(duì)綿羊ADRA2A基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增和序列分析，發(fā)現(xiàn)在擴(kuò)增片段的第217位存在一個(gè)C/A多態(tài)性位點(diǎn)，進(jìn)一步使用KASPar引物對(duì)對(duì)161只湖羊的多態(tài)性位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)和建立最小二乘模型，對(duì)基因型與尾脂重進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析，最終確定了本發(fā)明擴(kuò)增的ADRA2A基因片段可以作為與綿羊尾脂重相關(guān)的分子標(biāo)記。本發(fā)明的分子標(biāo)記可用于低脂型綿羊的育種和低脂型優(yōu)質(zhì)肉羊新品種的培育，為綿羊肉質(zhì)的遺傳改良提供了基因工程手段，具有重大的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子標(biāo)記制備技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及ADRA2A基因片段作為影響綿羊尾脂重的分子標(biāo)記及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

綿羊是最早被馴化的草食家畜，可追溯到11000年前的中石器時(shí)代末期。在漫長(zhǎng)的馴化過(guò)程中，動(dòng)物的行為習(xí)慣、體型外貌以及重要的經(jīng)濟(jì)性狀因受到人工選擇和自然環(huán)境影響而發(fā)生了很大變化。研究表明，野生綿羊最早屬于瘦尾羊，但由于人工馴化和自然選擇，瘦尾羊部分進(jìn)化為脂尾型綿羊。綿羊脂尾(臀)性狀是在惡劣自然環(huán)境中生存的必需性狀，在天寒地凍、營(yíng)養(yǎng)匱乏等惡劣生態(tài)環(huán)境下，脂尾型綿羊能夠消耗脂肪提供能量來(lái)維持自身的新陳代謝，起到“保命”作用(劉真.肥尾和瘦尾羊全基因組選擇信號(hào)檢測(cè)[D].中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院,2015)。但近些年隨著人們生活水平的不斷提高以及對(duì)危害人類健康的心血管等疾病的高度關(guān)注，人們對(duì)肉品質(zhì)的要求也越來(lái)越高，都喜歡使用高蛋白、低脂肪、低膽固醇的肉類，高脂肉類逐漸受到冷落，脂尾(臀)型綿羊品種也越來(lái)越不受消費(fèi)者歡迎。此外，隨著規(guī)模化養(yǎng)殖以及牧民定居點(diǎn)不斷擴(kuò)建、牧草種植等配套設(shè)施的不斷完善，過(guò)多的尾脂沉積對(duì)綿羊自身已無(wú)太大意義，而且從養(yǎng)殖成本考慮，生產(chǎn)1kg脂肪消耗的飼草可產(chǎn)生2kg瘦肉，顯然過(guò)多的脂肪沉積也會(huì)增加養(yǎng)殖成本。因此在肉羊生產(chǎn)實(shí)踐中，通過(guò)遺傳改良減少綿羊尾部脂肪沉積是提高生產(chǎn)效益的有效途徑，對(duì)低脂肉用綿羊的培育具有重要的理論價(jià)值與實(shí)際意義。

目前對(duì)綿羊脂肪沉積候選基因的研究已經(jīng)取得顯著的進(jìn)展，其中PDGFD、PPARG等基因已被確定對(duì)綿羊脂肪沉積具有顯著的影響。

血小板源生長(zhǎng)因子D基因(Platelet-derived growth factor D gene，PDGFD)是血小板源性生長(zhǎng)因子家族蛋白的一員,它最早是在人類血小板中被檢測(cè)并純化出來(lái)。PDGFD具有廣泛的生理作用，其作用機(jī)理復(fù)雜，主要富集在脂類生物合成、磷脂代謝、細(xì)胞形態(tài)發(fā)生、生殖過(guò)程及細(xì)胞調(diào)節(jié)等生物學(xué)過(guò)程，與動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育以及脂肪沉積密切相關(guān)。研究表明，PDGF基因能夠促進(jìn)脂肪前體細(xì)胞增殖并抑制其分化(Artemenko et al.2005； et al.2008)。實(shí)時(shí)定量PCR研究表明，PDGFD在人類脂肪組織中的表達(dá)量比除甲狀腺組織之外的其他組織都要高(La Rochelle et al.2001)。此外，劉真等研究發(fā)現(xiàn)在肥瘦尾之間，呼倫貝爾羊PDGFD基因表達(dá)量顯著高于藏羊，并且通過(guò)相對(duì)定量驗(yàn)證PDGFD基因與尾部脂肪沉積密切相關(guān)(劉真.肥尾和瘦尾羊全基因組選擇信號(hào)檢測(cè)[D].中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院,2015)。

PPARG屬于過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體家族的一員，是誘導(dǎo)脂肪分化的充分且必需條件，能夠啟動(dòng)脂肪細(xì)胞的分化。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，PPARG可以促進(jìn)纖維母細(xì)胞轉(zhuǎn)化成脂肪細(xì)胞，以及在小鼠上敲出該基因并給飼喂高脂肪食物的情況下，發(fā)現(xiàn)小鼠的體重和體脂肪含量顯著低于對(duì)照組并有棕色脂肪沉積。此外，PPARG可促使小脂肪細(xì)胞生成、參與調(diào)節(jié)脂蛋白酯酶、乙酰-CoA合成酶、脂肪酸結(jié)合蛋白及脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白等的表達(dá)；PPARG在蛋白質(zhì)、葡萄糖及脂質(zhì)的代謝過(guò)程中也具有重要調(diào)控作用，能夠調(diào)控細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期和生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中部分相關(guān)基因的表達(dá)。這些研究表明，PPARG與脂肪細(xì)胞的生長(zhǎng)分化過(guò)程密切相關(guān)。