[發(fā)明專利]一種二氫硫辛酸琥珀酰轉(zhuǎn)移酶抑制劑的篩選方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910014582.1
• 申請(qǐng)日: 2019-01-08
• 公開（公告）號(hào): CN109632773B
• 公開（公告）日: 2021-11-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊松;陳彪;龍青素;趙永亮;吳元元;薛偉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 貴州大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N21/76
• 分類號(hào): G01N21/76;A61K31/4245;A61P25/28;A61P9/00;A61P35/02
• 代理公司: 貴陽(yáng)中新專利商標(biāo)事務(wù)所 52100
• 代理人: 李亮;程新敏

本發(fā)明涉及一種二氫硫辛酸琥珀酰轉(zhuǎn)移酶抑制劑的篩選方法。包括在離體及活體條件下對(duì)二氫硫辛酸琥珀酰轉(zhuǎn)移酶抑制劑的篩選。首先通過(guò)待篩選抑制劑預(yù)處理總蛋白或重組二氫硫辛酸琥珀酰轉(zhuǎn)移酶或者活細(xì)胞，然后用能標(biāo)記二氫硫辛酸琥珀酰轉(zhuǎn)移酶的探針處理反應(yīng)體系，經(jīng)點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)偶聯(lián)Biotin?N₃后再通過(guò)streptavidin blot法進(jìn)行成像分析。本方法的建立對(duì)二氫硫辛酸琥珀酰轉(zhuǎn)移酶抑制劑的篩選具有重要意義。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及的是生物化學(xué)領(lǐng)域，涉及一種二氫硫辛酸琥珀酰轉(zhuǎn)移酶抑制劑的篩選方法，具體地說(shuō)，涉及一種二氫硫辛酸琥珀酰轉(zhuǎn)移酶抑制劑的離體及活體篩選方法。

背景技術(shù)

二氫硫辛酸琥珀酰轉(zhuǎn)移酶(DLST)作為α-酮戊二酸脫氫酶復(fù)合體(α-ketoglutarate dehydrogenase complex)的核心組成部分，在催化α-酮戊二酸轉(zhuǎn)換成琥珀酰輔酶A過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，是三羧酸循環(huán)(TCA)的重要組成部分^[1-3]。研究表明DLST蛋白與多種疾病的發(fā)生密切相關(guān)，如阿爾茨海默病^[4-6]、白血病^[7]、心血管疾病^[8]等，因此DLST蛋白是一種重要的疾病治療靶標(biāo)，DLST抑制劑成為疾病治療相關(guān)的潛在藥物。當(dāng)前，高效、高選擇性的DLST抑制劑幾乎沒(méi)有，因而導(dǎo)致對(duì)DLST的功能研究面臨極大的挑戰(zhàn)。

近年來(lái)，CPI613作為一種α-酮戊二酸脫氫酶復(fù)合體抑制劑，目前已被用于治療白血病和非小細(xì)胞肺癌的臨床實(shí)驗(yàn)^[9-10]。CPI613是一種硫辛酸類似物，通過(guò)與硫辛酸競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合DLST從而抑制DLST活性，但同時(shí)CPI613也能抑制丙酮酸脫氫酶復(fù)合體的活性，其選擇性欠缺，因而亟需開發(fā)高效、專一的DLST抑制劑。然而由于缺乏有效的DLST抑制劑篩選平臺(tái)，目前對(duì)DLST抑制劑的研發(fā)仍然十分艱難，因此構(gòu)建一種高效的DLST抑制劑篩選方法對(duì)于DLST抑制劑的開發(fā)及其功能研究具有十分重要的意義。

本申請(qǐng)所引用背景技術(shù)文獻(xiàn)如下所示：

[1]Yang,L.；Shi,Q.；Ho,D.J.；Starkov,A.A.；Wille,E.J.；Xu,H.；Chen,H.L.；Zhang,S.；Stack,C.M.；Calingasan,N.Y.；Gibson,G.E.；Beal,M.F.Mice deficient indihydrolipoyl succinyl transferase show increased vulnerability tomitochondrial toxins.Neurobiol.Dis.,2009,36,320-330.

[2]Starkov,A.A.An update on the role of mitochondrialα-ketoglutaratedehydrogenase in oxidative stress.Mol.Cell.Neurosci.,2013,55,13-16.

[3]Guo,H.；Madzak,C.；Du,G.；Zhou,J.Mutagenesis of conserved active siteresidues of dihydrolipoamide succinyltransferase enhances the accumulation ofα-ketoglutarate in Yarrowia lipolytica.Appl.Microbiol.Biotechnol.,2016,100,649-659.

[4]Gibson,G.E.；Blass,J.P.；Beal,M.F.；Bunik,V.Theα-ketoglutarate-dehydrogenase complex.Mol.Neurobiol.,2005,31,43-63.