[發明專利]檢測FGD1基因突變的引物和方法

在審

• 申請號: 201910012761.1
• 申請日: 2019-01-07
• 公開（公告）號: CN109628576A
• 公開（公告）日: 2019-04-16
• 發明（設計）人: 牛林梅;吳鵬飛;王淑一
• 申請（專利權）人: 杭州艾迪康醫學檢驗中心有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6869;C12N15/11
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務所有限公司 33100
• 代理人: 黃素萍;徐關壽

本發明公開了檢測FGD1 659+27T>C和482?113C>T兩個堿基突變的引物和方法；采用Sanger測序技術，可用于快速檢測該突變位點。利用本發明完成的檢測結果準確，可以輔助診斷Aarskog綜合征患者的基因突變情況。利用本發明所述引物和方法便于判斷和分析產生的基因突變是否會造成Aarskog綜合征，對Aarskog綜合征的臨床鑒別及診斷有重要的參考意義。

技術領域

本發明屬生命科學和生物技術領域，特別涉及檢測FGD1 659+27T>C和482-113C>T位點突變的引物，采用普通PCR結合Sanger測序技術，可用于快速檢測FGD1位點的突變情況。

背景技術

Aarskog綜合征(Aarskog Syndrome，AAS)是一種罕見的遺傳性面-指-生殖器異常綜合征，主要臨床表現為身材矮小、面部、指(趾)和生殖器形態改變，但程度各異，還可合并其他多種異常，目前診斷必備的表型尚不明確。AAS是由位于Xp11.21的FGD1基因突變所致的一種X連鎖隱性遺傳性疾病。

FGD1基因(FYVE，RhoGEF and PH domain containing l,NC_000023)共含有18個外顯子，能夠編碼形成一種鳥嘌呤核苷酸轉化因子(guanine nucleotide exchangefactor,GEF)。目前已經發現有多種FGD1的突變可導致AAS的發生，包括第4，6，9-12及17號外顯子區的缺失突變，第3和7號外顯子區的插入突變，第3-8及15號外顯子區的錯義突變，以及在7、8、11號內含子剪切位點上的突變等。FGD1基因的突變可導致其編碼的GEF的結構域發生空間結構改變，從而干擾了FGD1/Cdc42正常的信號傳遞系統，導致AAS的發生。

AAS患者可出現身材矮小、智力缺陷及生育障礙等多種復雜、嚴重的臨床癥狀，嚴重威脅著患者的身體健康和生活質量。通過檢測FGD1基因突變情況，將有望據此對高危的可疑人群(如有相關家族史，或有放射性輻射接觸史等)開展早期篩查和干預，從而將有利于對該病進行基因篩查、產前診斷、植入前遺傳學分析、靶位治療和新藥研發等，最終對該病的早期預防與診斷、優生與優育等產生重要意義。

發明內容

本發明的目的是提供一種檢測FGD1 659+27T>C和482-113C>T位點突變的引物，采用PCR結合Sanger測序技術，可用于快速檢測FGD1 659+27T>C和482-113C>T位點的突變情況。所述檢測FGD1 659+27T>C和482-113C>T位點突變情況的引物，包括：擴增FGD1659+27T>C和482-113C>T位點5號外顯子的引物，其堿基序列為：

FGD1-EXON-3-F：TGTAAAACGACGGCCAGTGCCTCCTGAGTTCAAGCAAT

FGD1-EXON-3-R：AACAGCTATGACCATGTCTGAGGTGGGTGGTGGAC。

進一步地，還包括測序引物，其堿基序列為：

M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT

M13R：AACAGCTATGACCATG

本發明提供了檢測FGD1 659+27T>C和482-113C>T位點突變情況的方法，包括以下步驟：

(1)抽提血液中的基因組DNA；

(2)用PCR擴增步驟1中提取的DNA；

(3)對步驟2中的擴增產物進行測序；

(4)對測序結果進行判斷，確定FGD1 659+27T>C和482-113C>T位點是否發生突變。