[發明專利]一種含發酵培養基的復合微生態制劑制備方法

在審

• 申請號: 201910010886.0
• 申請日: 2019-01-07
• 公開（公告）號: CN109527220A
• 公開（公告）日: 2019-03-29
• 發明（設計）人: 呂鋒;張集匯
• 申請（專利權）人: 呂鋒
• 主分類號: A23K20/105
• 分類號: A23K20/105;A23K10/12;A23K10/14;A23K40/10;A23K10/30;A23K10/37;A23K50/75
• 代理公司: 北京科家知識產權代理事務所(普通合伙) 11427
• 代理人: 陳娟

1.一種含固態發酵培養基的復合微生態制劑，由酵母菌與L-纈氨酸產生菌在含有甜菜堿的固態培養基中聯合發酵培養后處理得到，其特征在于，所述復合微生態制劑含有包括L-纈氨酸在內的胞外代謝物、包括甜菜堿在內的固態發酵培養基組分，以及酵母菌與L-纈氨酸產生菌的菌體內容物。

2.一種權利要求1所述復合微生態制劑的制備方法，其特征在于，包括以下主要步驟：

(1)配置液體培養基，培養酵母菌種子液和L-纈氨酸產生菌種子液；

(2)在含甜菜堿的固態發酵培養基中，酵母菌與L-纈氨酸產生菌進行有氧-無氧二段聯合發酵；

(3)發酵結束后，烘干干燥，去除易揮發乙醇副產物；

(4)加水攪拌，得物料混合液，加入溶菌酶對微生物菌體進行溶菌破壁，菌體破壁后蛋白酶酶解去苦；

(5)酶解后升溫加熱，進行體系內自螯合反應；

(6)煮沸滅酶，濃縮，制粒機中制粒，得到所述微生態制劑。

3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)中，

酵母菌種子液培養基的組成為：復合糖化液80-100ml/L，葡萄糖20-30g/L，蛋白胨10-15g/L，酵母粉3-5g/L，甘油1-3g/L，硫酸銨0.5-1g/L，磷酸氫二鉀1-1.5g/L，氯化鈉1-2g/L，硫酸鎂0.4-0.5g/L，硫酸錳0.01-0.05g/L，甜菜堿1-3g/L，pH值5.5-6.2；

L-纈氨酸產生菌種子液培養基的組成為：復合糖化液80-100ml/L，葡萄糖15-20g/L，牛肉膏5-10g/L，大豆油1-2g/L，蛋白胨5-10g/L，酵母粉3-5g/L，硫酸氫銨0.5-0.8g/L，磷酸氫二鉀1-2g/L，氯化鈉1-2g/L，碳酸鈣2-3g/L，乙酸鈉0.5-1g/L，硫酸鎂0.4-0.6g/L，硫酸錳0.01-0.05g/L，吐溫801.0-2.5ml/L，甜菜堿1-3g/L，pH值6.5-7.0；

誘導培養過程如下：

S1：一級種子培養：將酵母菌和L-纈氨酸產生菌的菌種懸液，按照3-5％的接種量接種于含有種子培養基的三角瓶中，28～30℃、180～200r/min搖床振蕩培養18～24h至對數期，得到一級種子液；

S2：搖瓶種子培養：將一級種子液按照10％的接種量接種到含有種子培養基的搖瓶中，28℃～30℃、180～200r/min搖床振蕩培養20～24h至對數期，獲得搖瓶種子培養液；

S3：種子罐培養：在5L種子罐中裝入種子罐體積40-50％的種子培養基液，然后在115℃下加熱15分鐘進行滅菌，冷卻；按10％-15％接種量將搖瓶種子接種到種子罐，培養溫度30～32℃，控制溶氧水平30-35％，自然pH控制，培養12-20h至對數期，從而得到種子液。

4.根據權利要求2-3所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)中，所述的復合糖化液制備方法為：

S1：將質量比為5:1的玉米粉和大豆粉溶于去離子水中，使得玉米粉和大豆粉的總量與水的質量體積比為1:3-4；

S2：加熱釜中在50-55℃條件下保溫浸泡90-150min后，升溫至75-85℃，繼續保溫100-120min；

S3：趁熱紗布過濾，過濾后將濾液煮沸10-15min進行糖化，隨后冷卻至室溫，添加甜菜堿至溶液質量比為0.1-0.5wt％，從而得到復合糖化液。

5.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，固態發酵培養基制備如下：

將玉米粉、脫脂大豆粉、超微粉碎麩皮粉、甜菜堿混合均勻得到固態培養基，滅菌備用；其中，玉米粉：脫脂大豆粉：超微粉碎麩皮粉：甜菜堿的重量比為100:20-40:10-30:1-5。