[發明專利]一種在鼻咽癌檢測中應用的試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 201910009834.1
• 申請日: 2019-01-05
• 公開（公告）號: CN109609638B
• 公開（公告）日: 2022-08-02
• 發明（設計）人: 李旭輝;張雷;郭書娟
• 申請（專利權）人: 敬善生物科技江蘇有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6858
• 代理公司: 北京漢鼎理利專利代理事務所(特殊普通合伙) 11618
• 代理人: 潘滿根

1.一種檢測鼻咽癌的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包括樣品DNA提取試劑、DNA甲基化修飾轉化試劑以及基于熒光定量PCR方法檢測MSF1基因和RASSF1A基因甲基化的試劑，并且在MSF1和RASSF1A基因的甲基化PCR擴增引物序列上都含有CpG序列；在MSF1和RASSF1A基因的甲基化PCR擴增的每個引物序列上都至少包括二個CpG序列，并且有一個CpG序列位于5’端；并且檢測所述MSF1和RASSF1A基因的甲基化PCR擴增產物的每個探針上至少包括3個CpG序列，并且CpG不在探針的3’端和5’端，

基于熒光定量PCR方法檢測MSF1基因的試劑包括擴增MSF1基因的引物序列和探針：

上游引物序列SEQ ID NO:1：TTTTCGTCGTTGTTTTTCG；

下游引物序列SEQ ID NO:2：ATAATCCCATCGAACTACG；

檢測探針序列SEQ ID NO:7：TTAACCGCGAAATCCGAC；和

基于熒光定量PCR方法檢測RASSF1A基因的試劑包括擴增RASSF1A基因的引物序列和探針：

上游引物序列SEQ ID NO:3：GCGTTGAAGTCGGGGTTCG

下游引物序列SEQ ID NO:4：CCCGTACTTCGCTAACTTTAAACG；

檢測探針序列SEQ ID NO:8：AAACGCGAACCGAACGAAACC。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑還包括用PCR方法檢測內對照參考基因的試劑，所述內對照參考基因為ACTB基因；檢測所述內參基因的試劑包括一對非甲基化位點擴增引物、一條檢測非甲基化位點探針。

3.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于：檢測所述ACTB基因的試劑包括擴增ACTB基因引物和探針：

上游引物序列SEQ ID NO:5：AAAAAGGAGGTTGGAT；

下游引物序列SEQ ID NO:6：CTCCCRCAAAACAACCAC；

檢測探針序列SEQ ID NO:9：CCACCTTACCCTAAACACTACAAC。

4.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述樣品DNA來自于鼻咽組織和/或鼻咽拭子DNA。