[發明專利]基于Ru(bpy)3

有效

• 申請號: 201910005928.1
• 申請日: 2019-01-04
• 公開（公告）號: CN109490285B
• 公開（公告）日: 2021-04-09
• 發明（設計）人: 戴宏;房丹丹;張書培;高利紅;鄭祥欽;衣歡
• 申請（專利權）人: 福建師范大學
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76;G01N27/30;G01N27/327;G01N33/531
• 代理公司: 福州智理專利代理有限公司 35208
• 代理人: 王義星

1.一種基于Ru(bpy)₃²⁺和Bi納米棒自增強體系構建的唾液酸可再生電致化學發光免疫傳感器的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1） 玻碳電極（GCE）首先在鋪有氧化鋁粉末的麂皮上機械打磨拋光，用二次水洗去表面殘留粉末，再移入超聲水浴中清洗，直至清洗干凈，再依序用乙醇，稀酸和水徹底洗滌，得到表面潔凈的玻碳電極；

（2） 取3 μL濃度為5 mg/mL的C₆₀溶液于處理過的玻碳電極表面，紅外燈下烘干，冷卻至室溫，得到C₆₀修飾電極；隨后，向修飾電極上滴涂3 μL 5 mg/mL TiO₂ 類八面體（TiO₂MCs），在紅外燈下烘干，待冷卻至室溫后，得到TiO₂ MCs/C₆₀ 修飾電極；

（3） 滴加3μL 4-MPBA于步驟（2）所制得的修飾電極界面，并在室溫下孵育40 分鐘，4-MPBA通過Ti-S鍵自組裝到TiO₂ MCs/C₆₀修飾電極表面，得到4-MPBA/TiO₂ MCs/C₆₀修飾電極；

（4） 取體積比為1:1的5 mg/mL金紅石TiO₂介晶（N- TiO₂）溶液與1.0×10^-2 M釕聯吡啶（Ru(bpy)₃²⁺）在室溫下混合振蕩6 小時, 使N-TiO₂表面吸附足夠的發光試劑Ru(bpy)₃²⁺，離心、洗滌、再分散得到N-TiO₂@Ru(bpy)₃²⁺復合物；向上述N-TiO₂@Ru(bpy)₃²⁺復合物溶液中滴加100 μL 10 mM 的4-巰基苯甲酸（4-MBA）并在室溫下攪拌1小時, 接著，再向所獲得的混合溶液中加入200 μL5 mg/mL 的鉍納米棒Bi NRs，室溫振蕩40 分鐘，離心、洗滌、再分散得到N-TiO₂@Ru(bpy)₃²⁺@Bi NRs復合物；隨后，將濃度比為2:1的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽（EDC）及N-羥基琥珀酰亞胺（NHS）加入到上述獲得的N-TiO₂@Ru(bpy)₃²⁺@BiNRs復合物溶液中，室溫孵育50分鐘后，滴加100μL 40 ng/mL 的唾液酸抗體（Ab）于所獲得的混合溶液中，室溫振蕩40分鐘 離心，洗滌，再分散制得N-TiO₂@Ru(bpy)₃²⁺@Bi NRs-Ab復合物； 最后，向上述N-TiO₂@Ru(bpy)₃²⁺@Bi NRs-Ab復合物溶液中滴加50μL 1 wt% BSA 封閉非特異性吸附位點，離心，洗滌，再分散，最終制得N-TiO₂@Ru(bpy)₃²⁺@Bi NRs-Ab-BSA復合物溶液作為電致化學發光探針，儲存在4 ℃冰箱中備用；

（5）將步驟（3）制得的4-MPBA/TiO₂ MCs/C₆₀修飾玻碳電極浸入到不同濃度的唾液酸(SA）標準溶液中并在室溫下孵育40 分鐘，隨后，用去離子水沖洗電極表面，制得SA/4-MPBA/TiO₂ MCs/C₆₀修飾玻碳電極，然后滴加3μL步驟（4）制備的電致化學發光探針N-TiO₂@Ru(bpy)₃²⁺@Bi NRs-Ab-BSA復合物溶液于SA/4-MPBA/TiO₂ MCs/C₆₀修飾玻碳電極，室溫下反應40 分鐘，用去離子水沖洗電極表面，制得N-TiO₂@Ru(bpy)₃²⁺@Bi NRs-Ab-BSA/SA/4-MPBA/TiO₂ MCs/C₆₀修飾玻碳電極；

（6）將步驟（5）制得的N-TiO₂@Ru(bpy)₃²⁺@Bi NRs-Ab-BSA/SA/4-MPBA/TiO₂ MCs/C₆₀修飾玻碳電極浸入到pH為6的PBS溶液中一段時間，SA與4-MPBA形成的硼酸酯鍵解離，致使SA及與SA連接的ECL探針脫離電極界面，得到pH 誘導的自清潔電極。