[發(fā)明專利]基于CRISPR效應(yīng)系統(tǒng)的多重診斷

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201880089710.2
• 申請(qǐng)日: 2018-12-20
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111836903A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-10-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: F·張;B·蔡徹;J·戈滕貝格;O·阿布達(dá)耶
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 博德研究所;麻省理工學(xué)院;哈佛學(xué)院院長(zhǎng)等
• 主分類號(hào): C12Q1/6844
• 分類號(hào): C12Q1/6844;C12Q1/6804;G01N33/68;G01N33/53
• 代理公司: 北京市金杜律師事務(wù)所 11256
• 代理人: 陳文平;袁元

1.一種核酸檢測(cè)系統(tǒng)，所述核酸檢測(cè)系統(tǒng)包括：

i)兩個(gè)或更多個(gè)CRISPR系統(tǒng)，每一CRISPR系統(tǒng)包含Cas蛋白和向?qū)Х肿樱鱿驅(qū)Х肿影軌蚪Y(jié)合相應(yīng)靶分子的向?qū)蛄胁⑶冶辉O(shè)計(jì)成與所述Cas蛋白形成復(fù)合物；和

ii)檢測(cè)構(gòu)建體組，每一檢測(cè)構(gòu)建體包含優(yōu)先被所述Cas蛋白中的一者切割的切割基序序列，

其中每一CRISPR系統(tǒng)的所述Cas蛋白表現(xiàn)出附帶核酸裂解活性并且優(yōu)先裂解所述檢測(cè)構(gòu)建體組中的一者或多者的所述切割基序序列。

2.一種用于檢測(cè)體外樣品中兩種或更多種靶多肽的存在的系統(tǒng)，所述系統(tǒng)包括：

i)檢測(cè)構(gòu)建體組，每一檢測(cè)構(gòu)建體包含優(yōu)先被Cas蛋白中的一者切割的切割基序序列；

ii)檢測(cè)適體組，每一檢測(cè)適體被設(shè)計(jì)成結(jié)合至所述兩種或更多種靶多肽中的一者，并且每一檢測(cè)適體包含優(yōu)先被兩個(gè)或更多個(gè)CRISPR系統(tǒng)中的一者的Cas蛋白切割的切割基序序列；掩蔽的RNA聚合酶啟動(dòng)子結(jié)合位點(diǎn)或掩蔽的引物結(jié)合位點(diǎn)；和觸發(fā)序列模板，所述觸發(fā)序列模板編碼觸發(fā)序列；

iii)兩個(gè)或更多個(gè)CRISPR系統(tǒng)，每一CRISPR系統(tǒng)包含Cas蛋白和向?qū)Ф嗪塑账幔鱿驅(qū)Ф嗪塑账岚軌蚪Y(jié)合由所述觸發(fā)序列模板編碼的所述觸發(fā)序列的向?qū)蛄校?/p>

其中一旦被所述觸發(fā)序列活化，所述Cas蛋白就表現(xiàn)出附帶核酸裂解活性并且裂解基于核酸的掩蔽構(gòu)建體的非靶序列。

3.如權(quán)利要求1所述的系統(tǒng)，所述系統(tǒng)還包括核酸擴(kuò)增試劑用于擴(kuò)增所述靶序列。

4.如權(quán)利要求2所述的系統(tǒng)，所述系統(tǒng)還包括核酸擴(kuò)增試劑用于擴(kuò)增所述靶序列。

5.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的系統(tǒng)，其中所述兩個(gè)或更多個(gè)CRISPR系統(tǒng)是靶向RNA的Cas蛋白、靶向DNA的Cas蛋白或它們的組合。

6.如權(quán)利要求5所述的系統(tǒng)，其中靶向RNA的Cas蛋白包含一個(gè)或多個(gè)HEPN結(jié)構(gòu)域。

7.如權(quán)利要求6所述的系統(tǒng)，其中所述一個(gè)或多個(gè)HEPN結(jié)構(gòu)域包含RxxxxH基序序列。

8.如權(quán)利要求6所述的系統(tǒng)，其中所述RxxxH基序包含R{N/H/K]X₁X₂X₃H序列。

9.如權(quán)利要求8所述的系統(tǒng)，其中X₁是R、S、D、E、Q、N、G或Y，并且X₂獨(dú)立地是I、S、T、V或L，并且X₃獨(dú)立地是L、F、N、Y、V、I、S、D、E或A。

10.如權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)所述的系統(tǒng)，其中所述Cas蛋白是靶向RNA的CRISPRCas13蛋白。

11.如權(quán)利要求10所述的系統(tǒng)，其中所述Cas13蛋白是Cas13a、Cas13b或Cas13c蛋白。

12.如權(quán)利要求11所述的系統(tǒng)，其中所述Cas13蛋白是Cas13 a蛋白。

13.如權(quán)利要求12所述的系統(tǒng)，其中所述Cas13a蛋白來(lái)自選自由以下組成的組的屬的生物體：纖毛菌屬、李斯特菌屬、棒狀桿菌屬、薩特氏菌屬、軍團(tuán)菌屬、密螺旋體屬、產(chǎn)線菌屬、真桿菌屬、鏈球菌屬、乳桿菌屬、支原體屬、擬桿菌屬、弗維菌屬、黃桿菌屬、單絲殼屬、固氮螺菌屬、葡糖醋桿菌屬、奈瑟氏菌屬、羅氏菌屬、細(xì)小棒菌屬、葡萄球菌屬、硝酸鹽裂解菌屬、支原體屬、彎曲桿菌屬和毛螺菌屬。

14.如權(quán)利要求12所述的系統(tǒng)，其中所述Cas13a蛋白選自表1、表2或它們的組合。

15.如權(quán)利要求11所述的系統(tǒng)，其中所述Cas13蛋白是Cas13b蛋白。