[發(fā)明專利]用于鑒別病毒性感染與細(xì)菌性感染的方法和設(shè)備

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201880085879.0
• 申請(qǐng)日: 2018-05-15
• 公開（公告）號(hào): CN111656191A
• 公開（公告）日: 2020-09-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: D·雅克希斯
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: D·雅克希斯;D·馮穆蒂烏斯;W·埃貝爾
• 主分類號(hào): G01N33/558
• 分類號(hào): G01N33/558;G01N33/569
• 代理公司: 廣州嘉權(quán)專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 44205
• 代理人: 黃琳娟

本發(fā)明涉及一種用于檢測(cè)和區(qū)分病毒性感染與細(xì)菌性感染的即時(shí)檢測(cè)分析法，其可有效地協(xié)助快速區(qū)分病毒性感染與細(xì)菌性感染。更具體地，本發(fā)明涉及一種快速地區(qū)分病毒性感染和/或細(xì)菌性感染的免疫分析方法，其中病毒標(biāo)記物為干擾素誘導(dǎo)Mx?B蛋白，細(xì)菌標(biāo)記物為CRP/PCT/BPI。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及用于鑒別病毒性感染與細(xì)菌性感染的即時(shí)檢測(cè)(point of care，POC)分析領(lǐng)域。更具體地，本發(fā)明涉及一種快速區(qū)分病毒性感染和/或細(xì)菌性感染的免疫分析法。

背景技術(shù)

發(fā)燒是導(dǎo)致兒童到全科診所和兒科診所的急診中心就診的常見原因。最常見的是，發(fā)燒與呼吸道感染或腸胃炎有關(guān)。兒童發(fā)燒的高發(fā)率和預(yù)防性施用不必要的抗生素，是對(duì)指示病毒性和/或細(xì)菌性感染的生物標(biāo)記物進(jìn)行快速篩選檢測(cè)的開發(fā)的原因。

在大約60％的病例中，嚴(yán)重的社區(qū)獲得性肺炎是由細(xì)菌性感染引起的，大約10％的患者需要進(jìn)入重癥監(jiān)護(hù)病房(ICU)。其余40％與呼吸道病毒有關(guān)。大多數(shù)呼吸道感染涉及咽炎，其中40％由病毒引起，而25-50％由A族β溶血性鏈球菌引起。后者會(huì)導(dǎo)致急性細(xì)支氣管炎和肺炎。

所有抗菌藥物中約有80％會(huì)在初級(jí)治療中被開出處方，其中多達(dá)80％的處方用于呼吸道適應(yīng)癥。迄今為止，呼吸道感染是初級(jí)治療中最常見的咳嗽原因。醫(yī)生經(jīng)常開廣譜抗生素的處方來(lái)治療咳嗽，包括急性支氣管炎，而且其中許多處方對(duì)患者的益處微乎其微，并且可能引起副作用和可能增強(qiáng)抗生素耐藥性。促使醫(yī)生施用抗生素的因素包括缺乏適當(dāng)?shù)募?xì)菌性感染診斷標(biāo)記物、對(duì)患者缺乏隨訪的擔(dān)憂以及時(shí)間壓力。

快速區(qū)分病毒性感染與細(xì)菌性感染仍然具有挑戰(zhàn)性。最近，已經(jīng)鑒別了許多新的診斷標(biāo)記物。這些標(biāo)記物中的數(shù)種表現(xiàn)出區(qū)分病毒性與細(xì)菌性感染的巨大前景。這類蛋白包括Mx-GTP酶和C反應(yīng)蛋白(CRP)。

Mx同源蛋白是高分子量GTP酶超家族的成員。因此，這些GTP酶由I型α/β或II型干擾素(IFN)上調(diào)。Mx GTP酶僅在IFNα/β而不在IFNγ處理的細(xì)胞中過度表達(dá)。I型干擾素在先天免疫反應(yīng)中起重要作用，并具有免疫調(diào)節(jié)、抗增殖和抗病毒的功能。

發(fā)明人自己的研究表明，Mx-同源人體蛋白具有以下優(yōu)點(diǎn)：1)在人體中的Mx-同源人體蛋白主要在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)。可以通過細(xì)胞內(nèi)染色在大多數(shù)細(xì)胞室中看到它們[16]。2)Mx-同源蛋白通過劑量依賴的方式進(jìn)行誘導(dǎo)[6]。3)Mx-同源人體蛋白由I型干擾素特異性誘導(dǎo)，而并非由IFN-γ、IL-I、TNF-α或細(xì)菌性感染引起的其他任何細(xì)胞因子誘導(dǎo)[8,12]。4)與外周血系統(tǒng)中的I型干擾素相比，Mx-同源人體蛋白具需要更長(zhǎng)的檢測(cè)時(shí)間[6]。因此，這些蛋白質(zhì)是鑒別病毒性疾病的標(biāo)記物[7,14,15]。此外，這些蛋白可用作標(biāo)記物，以鑒別接受I型干擾素治療的患者的IFN治療是否成功[5,9,10,11]。在早期研究中，發(fā)明人通過SDS-PAGE后的Western Blotting檢測(cè)到了這些蛋白質(zhì)。¹²但是該過程需要兩天以上。因此，發(fā)明人建立了ELISA，以在兩天內(nèi)檢測(cè)這些蛋白質(zhì)[13]。

基于這些事實(shí)和假設(shè)，即在細(xì)菌性感染患者體內(nèi)I型干擾素保持在正常水平內(nèi)，外周血中的Mx-同源蛋白表達(dá)是對(duì)病毒性感染靈敏且特異的標(biāo)記物。同樣地，據(jù)報(bào)道，大多數(shù)病毒性感染引起的急性期反應(yīng)濃度很小、C反應(yīng)蛋白(CRP)濃度小、降鈣素原(PCT)水平低和殺菌/通透性增強(qiáng)蛋白(BPI)濃度小。因此，這些蛋白質(zhì)將用于區(qū)分病毒源性疾病與細(xì)菌性病因疾病。由于CRP的血漿濃度在刺激后迅速增加，并以很短的半衰期迅速降低，因此CRP在診斷和監(jiān)測(cè)感染和炎性疾病中可成為非常有用的工具。在斯堪的納維亞，一般情況下，即時(shí)檢測(cè)CRP測(cè)試是對(duì)呼吸道感染患者進(jìn)行例行評(píng)估的一部分，其應(yīng)用具有成本效益。一般情況下，已發(fā)現(xiàn)CRP在診斷細(xì)菌性疾病以及部分區(qū)分細(xì)菌性與病毒性感染中具有重要價(jià)值。通常發(fā)現(xiàn)CRP的診斷價(jià)值優(yōu)于紅細(xì)胞沉降率(ESR)，優(yōu)于或等于白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)。即時(shí)檢測(cè)的缺點(diǎn)是檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)。這些測(cè)試需要至少30分鐘到2個(gè)小時(shí)。