[發(fā)明專利]免疫療法T細(xì)胞中CBLB的CRISPR-CAS9編輯的方法、組合物和組分

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201880085389.0
• 申請日: 2018-11-05
• 公開（公告）號: CN111556893A
• 公開（公告）日: 2020-08-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: A·S·科斯塔;J·D·馮特諾特;F·哈爾賓斯基;G·G·威爾斯特德;C·威爾遜
• 申請（專利權(quán)）人: 愛迪塔斯醫(yī)藥股份有限公司;朱諾治療學(xué)股份有限公司
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N9/22
• 代理公司: 北京坤瑞律師事務(wù)所 11494
• 代理人: 封新琴

1.一種基因組編輯系統(tǒng)，所述基因組編輯系統(tǒng)包含：

指導(dǎo)RNA(gRNA)，其包含與Casitas B譜系淋巴瘤原癌基因-b(CBLB)基因的靶序列互補(bǔ)的靶向結(jié)構(gòu)域；和

RNA指導(dǎo)的核酸酶。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基因組編輯系統(tǒng)，其中所述CBLB基因的靶序列包含外顯子2、外顯子4或外顯子5的序列。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基因組編輯系統(tǒng)，其中所述CBLB基因的靶序列包含選自SEQID NO:88-92的序列。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基因組編輯系統(tǒng)，其中所述靶向結(jié)構(gòu)域具有與所述CBLB基因的靶序列的至少85％互補(bǔ)性。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基因組編輯系統(tǒng)，其中所述靶向結(jié)構(gòu)域被配置為在CBLB靶位置的約500bp、約450bp、約400bp、約350bp、約300bp、約250bp、約200bp、約150bp、約100bp、約50bp、約25bp、或約10bp內(nèi)形成雙鏈斷裂或單鏈斷裂，從而改變CBLB基因表達(dá)。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的基因組編輯系統(tǒng)，其中CBLB基因表達(dá)被敲除或敲低。

7.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的基因組編輯系統(tǒng)，其中所述靶向結(jié)構(gòu)域被配置為靶向所述CBLB基因的編碼區(qū)或非編碼區(qū)，其中所述非編碼區(qū)包含所述CBLB基因的啟動子區(qū)域、增強(qiáng)子區(qū)域、內(nèi)含子、3'UTR、5'UTR或聚腺苷酸化信號區(qū)域。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)所述的基因組編輯系統(tǒng)，其中所述編碼區(qū)選自外顯子2、外顯子4和外顯子5。

9.根據(jù)權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的基因組編輯系統(tǒng)，其中所述靶向結(jié)構(gòu)域包含與選自SEQ ID NO:1至14的核苷酸序列相同或相差不超過3個(gè)核苷酸的核苷酸序列。

10.根據(jù)權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)所述的基因組編輯系統(tǒng)，其中所述RNA指導(dǎo)的核酸酶是釀膿鏈球菌Cas9核酸酶，并且所述靶向結(jié)構(gòu)域包含與選自以下的核苷酸序列相同或相差不超過約3個(gè)核苷酸的核苷酸序列：

(a)SEQ ID NO:3；

(b)SEQ ID NO:4；

(c)SEQ ID NO:8；

(d)SEQ ID NO:12；和

(e)SEQ ID NO:14。

11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的基因組編輯系統(tǒng)，其中所述釀膿鏈球菌Cas9核酸酶識別NGG的前間隔子相鄰基序(PAM)，所述基因組編輯系統(tǒng)靶向CBLB，并且所述靶向結(jié)構(gòu)域包含與選自SEQ ID NO:3、4、8、12和14的核苷酸序列相同或相差不超過3個(gè)核苷酸的核苷酸序列。

12.根據(jù)權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)所述的基因組編輯系統(tǒng)，其中所述RNA指導(dǎo)的核酸酶是金黃色葡萄球菌Cas9核酸酶。

13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的基因組編輯系統(tǒng)，其中所述金黃色葡萄球菌Cas9核酸酶識別NNNRRT或NNNRRV的PAM，并且所述基因組編輯系統(tǒng)靶向CBLB。

14.根據(jù)權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)所述的基因組編輯系統(tǒng)，其中所述RNA指導(dǎo)的核酸酶是突變體Cas9核酸酶。

15.根據(jù)權(quán)利要求1-14中任一項(xiàng)所述的基因組編輯系統(tǒng)，其中所述gRNA是模塊gRNA或嵌合gRNA。

16.根據(jù)權(quán)利要求1-15中任一項(xiàng)所述的基因組編輯系統(tǒng)，其中所述靶向結(jié)構(gòu)域的長度為約16、約17、約18、約19、約20、約21、約22、約23、約24、約25或約26個(gè)核苷酸。