[發(fā)明專利]具有兩個表達盒的猿猴腺病毒載體

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201880081337.6
• 申請日: 2018-10-16
• 公開（公告）號: CN111479926A
• 公開（公告）日: 2020-07-31
• 發(fā)明（設(shè)計）人: S.科羅卡
• 申請（專利權(quán)）人: 葛蘭素史密絲克萊恩生物有限公司
• 主分類號: C12N15/861
• 分類號: C12N15/861;A61K39/235
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 翟建偉;彭昶

猿猴腺病毒載體，其包含兩個表達盒，其中每個表達盒都包含轉(zhuǎn)基因和啟動子，且其中第一表達盒被插入所述猿猴腺病毒載體的E1區(qū)域中，且第二表達盒被插入所述腺病毒載體的與載體復(fù)制相容的區(qū)域中。

序列表

本申請含有已經(jīng)以ASCII形式電子提交且在此以其整體通過引用并入的序列表。所述ASCII拷貝，在2018年10月11日創(chuàng)建，命名為VU66441A_WO_SL.txt，且大小為178,926字節(jié)。

發(fā)明領(lǐng)域

本發(fā)明處于重組腺病毒載體的領(lǐng)域中。本發(fā)明涉及包含兩個表達盒的腺病毒載體。具體而言，本發(fā)明涉及猿猴腺病毒，諸如黑猩猩(chimp)腺病毒，其包含兩個表達盒。

發(fā)明背景

重組腺病毒可用于基因療法中且可用作疫苗。

由于它們的大轉(zhuǎn)基因容量和在各種靶標(biāo)組織中實現(xiàn)高度有效基因轉(zhuǎn)移的能力，人腺病毒已被廣泛用于基因轉(zhuǎn)移應(yīng)用。

然而，大多數(shù)人暴露于人腺病毒并發(fā)展對人腺病毒的免疫力。因此，需要有效地將分子遞送至靶標(biāo)并使預(yù)先存在的對人腺病毒血清型的免疫力的影響最小化的載體。猿猴腺病毒在這方面是有效的；它們與人病毒足夠密切相關(guān)，以有效地誘導(dǎo)對遞送的外源性抗原的免疫力，人對所述遞送的外源性抗原幾乎沒有預(yù)先存在的免疫力或沒有預(yù)先存在的免疫力。因此，基于猿猴腺病毒的病毒載體可以提供人來源的腺病毒載體用于開發(fā)基于核酸的疫苗的用途的替代方案。

復(fù)制缺陷的腺病毒將其基因組遞送至細胞的內(nèi)部，并且因為它們不復(fù)制，所以不擴增轉(zhuǎn)基因有效載荷。通常，E1基因被包含選擇的啟動子和對應(yīng)于一個或多個目標(biāo)基因的核酸序列的轉(zhuǎn)基因盒替換，產(chǎn)生復(fù)制缺陷的重組病毒。

在本領(lǐng)域中需要改進的重組腺病毒。

發(fā)明概述

本發(fā)明涉及猿猴腺病毒載體，其包含兩個表達盒。具體而言，本發(fā)明涉及猿猴腺病毒，諸如黑猩猩(chimp)腺病毒，其包含兩個表達盒。合適的黑猩猩腺病毒的實例包括ChAd155和ChAd83。

本發(fā)明的腺病毒載體可用作免疫原性組合物的組分，其用于誘導(dǎo)受試者中的免疫應(yīng)答，其在治療中的使用方法和制造方法。

術(shù)語“載體”是指含有或攜帶遺傳物質(zhì)且可以用于將外源基因引入生物體的試劑(諸如質(zhì)粒或病毒)。本發(fā)明的腺病毒載體源自非人猿猴腺病毒，也稱為“猿猴腺病毒”。優(yōu)選地，本發(fā)明的猿猴腺病毒載體是猿猴腺病毒。

本發(fā)明的腺病毒載體中的每個表達盒包含轉(zhuǎn)基因和啟動子。“轉(zhuǎn)基因”是編碼目標(biāo)多肽的核酸序列，其與側(cè)接所述轉(zhuǎn)基因的載體序列異源。核酸編碼序列以允許宿主細胞中的轉(zhuǎn)基因轉(zhuǎn)錄、翻譯和/或表達的方式可操作連接至調(diào)節(jié)組分。“啟動子”是允許RNA聚合酶的結(jié)合并指導(dǎo)基因的轉(zhuǎn)錄的核苷酸序列。通常，啟動子位于靠近轉(zhuǎn)錄起始位點的基因的非編碼區(qū)域中。

在本發(fā)明的腺病毒載體中，所述第一表達盒被插入病毒的E1區(qū)域中，且所述第二表達盒被插入腺病毒載體的第二區(qū)域中。

在本發(fā)明的包含兩個表達盒的猿猴腺病毒載體中，所述第一表達盒被插入猿猴腺病毒載體的E1區(qū)域中，且所述第二表達盒被插入腺病毒載體的與載體復(fù)制相容的區(qū)域中。如果腺病毒載體基因組的區(qū)域的破壞不會影響腺病毒載體復(fù)制的能力，則認為該區(qū)域“與載體復(fù)制相容”。

優(yōu)選地，在本發(fā)明的腺病毒載體中，所述第一表達盒被插入病毒的E1區(qū)域中，且所述第二表達盒被插入腺病毒載體的E3、HE1或HE2區(qū)域中。如本領(lǐng)域中眾所周知的，E3基因在轉(zhuǎn)導(dǎo)的早期表達，以準(zhǔn)備宿主細胞用于病毒復(fù)制。E3參與免疫調(diào)節(jié)。術(shù)語“HE1”用于描述位于L5和E4的終止密碼子之間的位點。術(shù)語“HE2”已用于定義位于ITR的末端和E4 mRNA的帽位點之間的位點。

例如，在ChAd155腺病毒載體中：