[發明專利]用于使用外排體相關基因編輯來治療癌癥的方法和組合物

在審

• 申請號: 201880080959.7
• 申請日: 2018-12-14
• 公開（公告）號: CN111479557A
• 公開（公告）日: 2020-07-31
• 發明（設計）人: 拉古·卡爾盧里;瓦萊麗·勒布勒;肖斐
• 申請（專利權）人: 得克薩斯州大學系統董事會
• 主分類號: A61K9/127
• 分類號: A61K9/127;A61P35/00;C12N15/113;C12N15/88;C12N9/22
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 鄭斌;張福譽

本文中提供了包含外排體的組合物，所述外排體在其表面上包含CD47并且還包含CRISPR系統。還提供了使用外排體進行基因編輯和通過基因編輯治療癌癥的方法。

相關申請的參考

本申請要求于2017年12月15日提交的美國臨時申請號62/599,340的優先權權益，其全部內容通過引用并入本文。

背景技術

1.技術領域

本發明總體上涉及醫學和腫瘤學領域。更特別地，其涉及外排體用于體內遞送核酸酶復合物以進行基因編輯的用途。

2.相關技術描述

基因編輯是一種允許在活細胞內修飾靶基因的技術。最近，利用CRISPR的細菌免疫系統根據需求執行基因編輯，徹底改變了科學家進行基因組編輯的方式。CRISPR系統的Cas9蛋白是一種RNA指導的DNA內切核酸酶，可通過改變其指導RNA序列而相對容易地被工程化為靶向新位點。該發現使得序列特異性基因編輯功能上有效。當前的CRISPR/Cas9技術提供了可靠的在體外編輯培養的細胞中的基因的方法；然而，需要靶向體內不同器官中特定細胞的新方法。

發明概述

因此，提供了被工程化以高效地將CRISPR-Cas9攜帶至不同器官和腫瘤從而使得能夠進行治療性基因編輯以控制癌癥和其他遺傳性疾病的外排體。在一個實施方案中，提供了包含外排體的組合物，其中所述外排體在其表面上包含CD47，并且其中所述外排體包含CRISPR系統。在一些方面中，CRISPR系統包含內切核酸酶和指導RNA(gRNA)。在一些方面中，內切核酸酶是Cas內切核酸酶。在一些方面中，內切核酸酶是Cas9內切核酸酶。在另一些方面中，內切核酸酶是Cpfl內切核酸酶。在一些方面中，指導RNA是單gRNA。在一些方面中，單gRNA是CRISPR-RNA(crRNA)。在一些方面中，單gRNA包含crRNA和反式激活CRISPR RNA(tracrRNA)的融合體(fusion)。在一些方面中，指導RNA包含crRNA和tracrRNA。在一些方面中，內切核酸酶和gRNA在外排體內的單個核酸分子上編碼。在一些方面中，內切核酸酶和gRNA在外排體內的獨立的核酸分子上編碼。

在一些方面中，CRISPR系統靶向致病突變。在一些方面中，致病突變是致癌突變。在一些方面中，致癌突變是癌基因中的激活突變。在一些方面中，致癌突變是腫瘤抑制基因中的抑制性突變。在一些方面中，CRISPR系統靶向無成藥性基因。在一些方面中，致癌突變是Kras^G12D。在一些方面中，外排體的至少2％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或98％(或其中可導出的任何值)包含內切核酸酶和gRNA。