[發明專利]用于表征藥物產品雜質的系統和方法

有效

• 申請號: 201880080694.0
• 申請日: 2018-12-18
• 公開（公告）號: CN111479618B
• 公開（公告）日: 2022-08-02
• 發明（設計）人: 王順海
• 申請（專利權）人: 瑞澤恩制藥公司
• 主分類號: C07K16/00
• 分類號: C07K16/00
• 代理公司: 北京市君合律師事務所 11517
• 代理人: 吳瑜;孫倩

提供了用于表征低分子量(LMW)蛋白質藥物產品雜質的系統和方法。一個實施方案使用結合質譜分析的親水相互作用色譜法(HILIC)。在從所述蛋白質藥物產品，例如抗體藥物產品中除去N?連接的聚糖后，通過分子量種類的大小確定自HILIC柱的LMW雜質洗脫。在一些實施方案中，在變性條件下進行所述HILIC分離，使得使用這種方法進行的LMW形式檢測與SDS?PAGE和CE?SDS方法兩者具有高度可比性。LMW藥物產品雜質包括但不限于輕鏈、半抗體、H2L、H2、HL、HC、肽主鏈截短的種類以及它們的組合。

技術領域

本發明總體上涉及蛋白質分離方法和細胞培養方法。

發明背景

在過去的二十年中，單克隆抗體(mAb)已成功地用于靶向廣泛范圍的治療領域(Walsh G.,Nature biotechnology,32:992-1000(2014)；Lawrence S.Naturebiotechnology,25:380-2(2007))。盡管mAb具有由兩個二硫鍵連接的重鏈組成的保守共價異四聚體結構，每個重鏈通過二硫鍵與輕鏈共價連接，但是即使在大量純化步驟之后，這些蛋白質也通常含有低水平的產品相關的雜質。低分子量(LMW)種類(例如肽主鏈截短的片段)和高分子量(HMW)種類(例如抗體二聚體種類)兩者均是產品相關的雜質的實例，所述雜質導致mAb產物的大小異質性。由于蛋白質聚集而在治療性mAb藥物產品中形成HMW種類可能潛在地損害藥物功效和安全性(例如引發不想要的免疫原性應答)(Rosenberg AS.TheAAPS journal,8:E501-7(2006)；Moussa EM,等人Journal of pharmaceutical sciences,105:417-30(2006))。任何治療性蛋白質的LMW種類都可能由產生過程中的宿主細胞蛋白酶活性引起。相對于抗體的單體形式，LMW種類通常具有低活性或實質上降低的活性，同時暴露可在體內導致免疫原性或潛在影響藥代動力學性質的新表位(Vlasak J,IonescuR.mAbs,3:253-63(2011))。因此，HMW種類和LMW種類兩者均被視為關鍵質量屬性，在藥物開發過程中并在制造過程中作為純化藥物物質的釋放測試的一部分定期監測所述關鍵質量屬性。