[發(fā)明專利]雙特異性抗原結(jié)合構(gòu)建體

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201880078802.0
• 申請(qǐng)日: 2018-12-21
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111448217A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-07-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: C·布朗什托;S·范德旺寧
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 阿根思公司
• 主分類號(hào): C07K16/46
• 分類號(hào): C07K16/46
• 代理公司: 北京世峰知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11713
• 代理人: 康健;王思琪

1.一種雙特異性抗原結(jié)合構(gòu)建體，其包含：

(a)結(jié)合第一靶抗原的單結(jié)構(gòu)域抗體(VHH)結(jié)合區(qū)，其中所述單結(jié)構(gòu)域抗體結(jié)合區(qū)與第一IgG Fc結(jié)構(gòu)域多肽可操作地連接；和

(b)結(jié)合第二靶抗原的常規(guī)IgG抗體的Fab部分，其中所述Fab部分與第二IgG Fc結(jié)構(gòu)域多肽可操作地連接；

其中所述第一IgG Fc結(jié)構(gòu)域多肽和所述第二IgG Fc結(jié)構(gòu)域多肽二聚化而形成所述雙特異性抗原結(jié)合構(gòu)建體。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙特異性抗原結(jié)合構(gòu)建體，其中所述VHH結(jié)合區(qū)和所述Fab部分是駱駝科動(dòng)物來(lái)源的。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的雙特異性抗原結(jié)合構(gòu)建體，其中所述第一IgG Fc結(jié)構(gòu)域多肽和所述第二IgG Fc結(jié)構(gòu)域多肽通過(guò)杵入臼相互作用、Fab臂交換(FAE)、靜電轉(zhuǎn)向相互作用或疏水性相互作用二聚化。

4.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的雙特異性抗原結(jié)合構(gòu)建體，其中所述第一IgG Fc結(jié)構(gòu)域多肽包含杵狀結(jié)構(gòu)取代，并且所述第二IgG Fc結(jié)構(gòu)域多肽包含臼狀結(jié)構(gòu)取代。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的雙特異性抗原結(jié)合構(gòu)建體，其中所述杵狀結(jié)構(gòu)取代選自由精氨酸(R)、苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)和色氨酸(W)組成的組。

6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的雙特異性抗原結(jié)合構(gòu)建體，其中所述臼狀結(jié)構(gòu)取代選自由丙氨酸(A)、天冬酰胺(N)、天冬氨酸(D)、甘氨酸(G)、絲氨酸(S)、蘇氨酸(T)和纈氨酸(V)組成的組。

7.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的雙特異性抗原結(jié)合構(gòu)建體，其具有在約100kDa至約120kDa的范圍的分子量。

8.一種藥物組合物，其包含根據(jù)權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)所述的雙特異性抗原結(jié)合構(gòu)建體。

9.一種核酸，其編碼根據(jù)權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)所述的雙特異性抗原結(jié)合構(gòu)建體。

10.一種載體，其包含根據(jù)權(quán)利要求9所述的核酸。

11.一種宿主細(xì)胞，其包含根據(jù)權(quán)利要求10所述的載體。

12.一種制備雙特異性抗原結(jié)合構(gòu)建體的方法，其包括培養(yǎng)根據(jù)權(quán)利要求11所述的宿主細(xì)胞并且分離所述雙特異性抗原結(jié)合構(gòu)建體。

13.一種在患有疾病或病癥的受試者中治療所述疾病或病癥的方法，其包括向所述受試者施用根據(jù)權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)所述的雙特異性抗原結(jié)合構(gòu)建體。

14.一種純化根據(jù)權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)所述的雙特異性抗原結(jié)合構(gòu)建體的方法，所述方法包括以下步驟：

(a)提供包含具有不同尺寸的抗原結(jié)合構(gòu)建體的混合抗原結(jié)合構(gòu)建體組合物；和

(b)基于尺寸分離所述混合抗原結(jié)合構(gòu)建體組合物；

其中所期望的雙特異性抗原結(jié)合構(gòu)建體包含

(i)結(jié)合第一靶抗原的單結(jié)構(gòu)域抗體(VHH)結(jié)合區(qū)，其中所述單結(jié)構(gòu)域抗體結(jié)合區(qū)與第一IgG Fc結(jié)構(gòu)域多肽可操作地連接；和

(ii)結(jié)合第二靶抗原的常規(guī)IgG抗體的Fab部分，其中所述Fab部分與第二IgG Fc結(jié)構(gòu)域多肽可操作地連接；其中所述第一IgG Fc結(jié)構(gòu)域多肽和所述第二IgG Fc結(jié)構(gòu)域多肽二聚化而形成所述雙特異性抗原結(jié)合構(gòu)建體，

從而純化所述雙特異性抗原結(jié)合構(gòu)建體。

15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中基于尺寸的分離包括尺寸排阻色譜法。

16.根據(jù)權(quán)利要求14或15所述的方法，其中最初通過(guò)蛋白A、蛋白G、蛋白L或CH1選擇性色譜法來(lái)純化所述混合抗原結(jié)合構(gòu)建體組合物。