[發(fā)明專利]用于抗微生物劑敏感性測試和細菌菌種確認的基于噬菌體的檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201880077890.2
• 申請日: 2018-10-01
• 公開（公告）號: CN111788314A
• 公開（公告）日: 2020-10-16
• 發(fā)明（設計）人: A·S·貝倫基;W·克羅爾;T·D·帕克;D·A·斯科菲爾德
• 申請（專利權）人: 奎多公司;基德協(xié)會有限公司
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04;C12Q1/18;C12Q1/34;C12N7/00;C12Q1/6869
• 代理公司: 北京坤瑞律師事務所 11494
• 代理人: 封新琴

1.一種用于同時確認細菌菌種并確定所述細菌菌種對測試抗微生物劑的敏感性的方法，包括：

(a)提供對所述細菌菌種特異性的轉化噬菌體，其中所述轉化噬菌體是具有用于編碼標記的基因的工程或重組噬菌體，所述基因對于人類和細菌菌種都是異源的；

(b)通過在不存在所述測試抗微生物劑的情況下培養(yǎng)所述細菌菌種，以產(chǎn)生原代無測試抗微生物劑的培養(yǎng)物并在存在所述轉化噬菌體的情況下培養(yǎng)所述原代無測試抗微生物劑的培養(yǎng)物來制備第一培養(yǎng)物；

(c)通過在存在所述測試抗微生物劑的情況下培養(yǎng)所述細菌菌種，以產(chǎn)生原代包含測試抗微生物劑的培養(yǎng)物來制備第二培養(yǎng)物；在存在所述轉化噬菌體的情況下培養(yǎng)原代包含測試抗微生物劑的培養(yǎng)物；和

(d)分析所述第一培養(yǎng)物和所述第二培養(yǎng)物以確定在所述第一培養(yǎng)物和所述第二培養(yǎng)物中的每一個中的所述標記的水平或活性。

2.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中，檢測所述第一培養(yǎng)物中的所述標記提供了所述細菌菌種作為對所述轉化噬菌體是特異性的細菌菌種的陽性確認。

3.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中，所述第二培養(yǎng)物中的所述標記的水平或活性比與所述第一培養(yǎng)物中的所述標記的水平或活性降低表明所述細菌菌種對所述測試抗微生物劑敏感。

4.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中，所述第二培養(yǎng)物中的所述標記的水平或活性與所述第一培養(yǎng)物中的所述標記的水平或活性一致或比所述第一培養(yǎng)物中的所述標記的水平或活性增高表明所述細菌菌種對所述測試抗微生物劑不敏感或是對所述測試抗微生物劑具有抗性的。

5.一種用于在有需要的受試者中診斷細菌性疾病的方法，包括：

(a)提供包含細菌菌種的受試者樣品；

(b)培養(yǎng)所述受試者樣品以產(chǎn)生多種原代細菌培養(yǎng)物；

(c)提供多個轉化噬菌體，每個轉化噬菌體都對不同的細菌菌種具有特異性，其中每個轉化噬菌體是具有編碼獨特標記的基因的工程或重組噬菌體，所述基因對于人類和細菌都是異源的；

(d)在存在(c)的轉化噬菌體的情況下培養(yǎng)(a)的原代細菌培養(yǎng)物以提供多個繼代細菌培養(yǎng)物，其中所述轉化噬菌體在所述繼代細菌培養(yǎng)物之間變化；

(e)分析所述繼代細菌培養(yǎng)物以確定所述繼代細菌培養(yǎng)物中獨特標記的存在或不存在；

(f)將所述獨特標記的檢測與細菌菌種的存在相關聯(lián)；和

(g)將細菌菌種的存在與細菌性疾病相關聯(lián)。

6.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的方法，其中，所述細菌菌種選自由革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌組成的組。