[發(fā)明專利]用于癌癥診斷的腫瘤來源的外泌體的免疫應(yīng)答譜分析

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201880077615.0
• 申請(qǐng)日: 2018-12-06
• 公開（公告）號(hào): CN111433608A
• 公開（公告）日: 2020-07-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 應(yīng)儀如;鄭毅然;李怡霏
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 新加坡科技研究局
• 主分類號(hào): G01N33/574
• 分類號(hào): G01N33/574;C12N5/0783
• 代理公司: 北京世峰知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11713
• 代理人: 康健;王思琪

本發(fā)明總體涉及產(chǎn)生腫瘤來源的外泌體誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答或癌癥特異性應(yīng)答譜，其通過從患有特定癌癥類型的患者的血液樣品分離腫瘤來源的外泌體，并體外測定腫瘤來源的外泌體對(duì)免疫細(xì)胞尤其是T細(xì)胞的免疫學(xué)影響來進(jìn)行。所述腫瘤來源的外泌體誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答或產(chǎn)生的癌癥特異性應(yīng)答譜可用于檢測或診斷受試者中的癌癥或癌癥類型以及鑒定受試者患有的癌癥類型是否響應(yīng)于該癌癥類型的治療的方法中。

相關(guān)申請(qǐng)

本申請(qǐng)要求2017年12月6日提交的新加坡臨時(shí)申請(qǐng)第10201710131X號(hào)的權(quán)益，其全部內(nèi)容通過援引加入合并于此。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明具體涉及檢測受試者中癌癥或癌癥類型的方法，所述方法包括體外測量腫瘤來源的外泌體對(duì)免疫細(xì)胞的功能影響以創(chuàng)建癌癥特異性應(yīng)答譜的步驟，其中所述癌癥特異性應(yīng)答譜指示所述受試者中的癌癥或癌癥類型。本發(fā)明還涉及癌癥管理的方法以及用于檢測或監(jiān)測癌癥或癌癥類型的測試、分析測定和試劑盒。

背景技術(shù)

與常規(guī)組織活檢相比，液體活檢具有較小的侵入性并且允許早期檢測和治療監(jiān)測，因此對(duì)于癌癥診斷而言是很有希望的手段。循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTC)，循環(huán)腫瘤DNA/RNA和腫瘤來源的外泌體(TEXs)是血液中的三種腫瘤標(biāo)志^1,2,3。其中，循環(huán)腫瘤DNA(ctDNA)的研究最為廣泛。然而，ctDNA可能不代表實(shí)際的活腫瘤細(xì)胞，因?yàn)樗鼈兪菑乃劳龌驅(qū)⑺赖哪[瘤細(xì)胞中釋放出來的，并且易于在血液中降解^4,5。另一方面，CTC的應(yīng)用受限于其數(shù)量稀少、異質(zhì)性的限制和方法上的差異^6,7。

TEXs是細(xì)胞外囊泡，其包含或結(jié)合細(xì)胞特異性生物分子，諸如蛋白質(zhì)，RNA或DNA。這些從實(shí)際的活腫瘤細(xì)胞釋放的生物分子受到脂質(zhì)雙層的保護(hù)并且可用作癌癥的生物標(biāo)志物和治療劑^8,9,10^,11。在Skog等顯示從患者血液中的TEXs提取的RNA可用于診斷膠質(zhì)母細(xì)胞瘤¹²以后，Byron等人開發(fā)了第一個(gè)可商購的基于外泌體RNA的肺癌診斷試劑盒，用于檢測EML4-ALK突變¹³。TEXs中的MicroRNA也已成為卵巢癌的生物標(biāo)志物¹⁴。TEXs中的蛋白質(zhì)也已在診斷結(jié)直腸癌¹⁵和胰腺癌¹⁶等方面顯示了成功。

到目前為止，就本發(fā)明人所知，所有基于外泌體的癌癥診斷技術(shù)都依賴于內(nèi)容譜分析，這意味著他們尋找癌癥類型特異性生物標(biāo)記。然而，在健康細(xì)胞發(fā)出的噪音海中尋找生物標(biāo)志物仍然是最大的挑戰(zhàn)之一。另外，腫瘤在DNA，RNA和表觀遺傳水平上具有很大異質(zhì)性。癌細(xì)胞與腫瘤微環(huán)境中免疫系統(tǒng)之間的患者特異性相互作用進(jìn)一步加劇了進(jìn)化和突變方面的變異^17,18,19。因此，鑒定出一組對(duì)癌癥類型高度敏感和特異的蛋白質(zhì)或核酸生物標(biāo)記在技術(shù)上具有挑戰(zhàn)性且成本很高。這就是為什么盡管出現(xiàn)了關(guān)于癌癥液體活檢的成功案例，但在臨床環(huán)境中，只有很有限數(shù)量的經(jīng)驗(yàn)證的癌癥生物標(biāo)志物可用于一些癌癥類型^20,21,22,23。此外，不同類型癌癥的生物標(biāo)志物列表并不詳盡。潛在的癌癥患者可能需要針對(duì)數(shù)百種生物標(biāo)志物進(jìn)行診斷，以確定其不患有特定的一系列癌癥。這可能會(huì)增加診斷成本，并需要抽取患者過多量的血液。因此，需要能夠同時(shí)檢測多種類型的癌癥并且不依賴于癌癥生物標(biāo)志物的更廣譜的癌癥診斷測試。

TEXs不僅包含指示其親代癌細(xì)胞身份的生物標(biāo)志物，它們而且還具有由腫瘤細(xì)胞部署的功能性信使分子以影響其他細(xì)胞，特別是免疫系統(tǒng)中的細(xì)胞^9,24,25,26。TEXs已被證明具有免疫抑制作用。它們包含或表達(dá)多種免疫調(diào)節(jié)分子的組合，例如IL-10，TGF-β，PD-1，PDL-1，TRAIL，F(xiàn)asL，CD39和CD73，以抑制T細(xì)胞的功能，削弱T細(xì)胞對(duì)刺激物的反應(yīng)，促進(jìn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的擴(kuò)增或誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞凋亡。同時(shí)，TEXs由于其濃縮的腫瘤抗原和熱休克蛋白也可以具有免疫刺激性^{27,25,26,28,29,30,31,32}。

具體實(shí)施方案