[發明專利]包含鐵螯合劑的凝血酶原時間試劑

有效

• 申請號: 201880076715.1
• 申請日: 2018-11-27
• 公開（公告）號: CN111406217B
• 公開（公告）日: 2021-05-04
• 發明（設計）人: 薩比內·皮爾格林;托馬斯·維塞爾;諾貝特·贊德
• 申請（專利權）人: 德國西門子醫學診斷產品有限公司
• 主分類號: G01N33/86
• 分類號: G01N33/86
• 代理公司: 北京康信知識產權代理有限責任公司 11240
• 代理人: 李海霞

本發明屬于凝血診斷領域，涉及基于重組或天然組織因子蛋白和磷脂的凝血酶原時間試劑，其能夠通過添加選自由鐵載體和3,5?二苯基?1,2,4?三唑構成的組中的鐵螯合劑來穩定。

技術領域

本發明屬于凝血診斷領域，并且涉及基于重組或天然組織因子蛋白和磷脂的凝血酶原時間試劑，該凝血酶原時間試劑能夠通過添加選自由鐵載體和3,5-二苯基-1,2,4-三唑構成的組中的鐵螯合劑來穩定。

背景技術

組織因子蛋白(簡稱組織因子或凝血活酶，英文為tissue factor)是一種對血液凝固至關重要的跨膜蛋白。它由通常不與流動的血液接觸的細胞表達，例如由內皮下(平滑肌)中的細胞和血管周圍的細胞(例如成纖維細胞)表達。然而，在血管受損的情況下，表達組織因子蛋白的細胞與因子VII發生接觸，因子VII是在血液中循環的促凝血因子。在鈣的存在下，組織因子蛋白和因子VII形成復合物，并且因子VII的活性增加約一千倍(F VIIFVIIa)。在磷脂和鈣存在的情況下，由組織因子蛋白和因子VIIa構成的復合物催化非活化凝血因子X轉化為活化因子Xa，從而加速凝血過程。組織因子與因子VII一起形成所謂的外源性凝血途徑，通過該途徑會通過盡可能快的血液凝結以防止血管的損傷。

在凝血診斷中，已經開發出不同的體外測試方法，借助于這些方法能夠確定患者的血液或血漿是否能夠毫無問題地凝結，或者是否存在凝結障礙。在凝血障礙的情況下，通常需要獲得有關存在障礙的原因的更精確認知，以便能夠選擇最佳的治療措施。為了研究血液凝結的不同的分功能，特別是為了研究血液凝結的外源性系統，使用組織因子蛋白作為活化劑。組織因子蛋白作為凝血激活劑的最廣為人知的應用是用于確定凝血酶原時間(PT)(同義詞：凝血活酶時間)的所謂快速測試。在快速測試及其變體方案中，通常將血漿樣品與組織因子蛋白、磷脂和鈣離子的混合物混合，并以秒為單位測量從混合的時間點直到能夠檢測到的纖維蛋白形成為止的持續時間。可替代地，在使用發色底物的凝血測試中，一種測試方法測量從混合的時間點直到達到特定吸光度變化為止的持續時間。組織因子蛋白還用于其他測試方法中，這些測試方法不用于確定凝血時間，而是用于確定凝血系統的各個成分，例如凝血酶生成潛力(ETP)(EP-A2-420332)。原則上，組織因子蛋白可用于涉及外源性凝血的各成分的所有測試。

凝血酶原時間試劑(組織因子試劑、PT試劑)對于相應測試具有中心意義。通常，凝血酶原時間試劑包括組織因子以及凝血活性磷脂。組織因子蛋白或者作為組織提取物從不同物種(例如兔子、人、牛)的不同器官(例如大腦、胎盤、肺)中獲得，或者重組產生。在現有技術中已知用于獲得組織因子蛋白和制備凝血酶原時間試劑的多種方法，并且許多凝血酶原時間試劑是可商購的。

目前，大多數可購買的凝血酶原時間試劑以凍干形式出售，因此在使用之前必須溶解在重構介質中，例如溶解在蒸餾水或緩沖溶液中。對此的原因是液態試劑的穩定性差。以凍干形式提供的試劑的缺點不僅在于制造商和用戶必須執行附加的時間和成本密集的方法步驟(凍干和重構)，而且這些附加的步驟包含會導致損害試劑質量的錯誤的風險。因此，期望的是液態、即用的試劑配方。但是，提供液態的凝血酶原時間試劑的問題是它們的穩定性差。凝血酶原時間試劑的穩定性例如能夠理解為在儲存期間維持對于規定血漿(例如正常血漿)的凝血酶原時間。理想情況下，凝血酶原時間試劑應在其儲存或使用期間維持其技術規格，或者說在最好情況下，應保持其生產時間點具有的屬性和特征。