[發明專利]用于生產3-羥基己二酸、α-氫化己二烯二酸及/或己二酸的基因修飾微生物以及該化學產品的制造方法

在審

• 申請號: 201880076294.2
• 申請日: 2018-11-29
• 公開（公告）號: CN111386339A
• 公開（公告）日: 2020-07-07
• 發明（設計）人: 磯部匡平;河村健司;山田勝成
• 申請（專利權）人: 東麗株式會社
• 主分類號: C12N9/04
• 分類號: C12N9/04;C12N1/21;C12P7/42;C12P7/44;C12N15/53
• 代理公司: 北京天昊聯合知識產權代理有限公司 11112
• 代理人: 常海濤;金小芳

1.一種基因修飾微生物，其導入有編碼下述(a)至(c)中任一者所述的多肽的核酸，或者該多肽的表達得以增強，

(a)由序列編號1至6以及213中任一者的氨基酸序列構成的多肽、

(b)由序列編號1至6以及213中任一者的氨基酸序列當中1個或幾個氨基酸發生取代、缺失、插入及/或添加后的氨基酸序列構成、且具有對還原3-氧代己二酰-輔酶A以生成3-羥基己二酰-輔酶A的反應進行催化的酶活性的多肽、

(c)相對于序列編號1至6以及213中任一者的氨基酸序列具有70％以上的序列同源性、且具有對還原3-氧代己二酰-輔酶A以生成3-羥基己二酰-輔酶A的反應進行催化的酶活性的多肽。

2.根據權利要求1所述的基因修飾微生物，其中，所述(b)及(c)中任一者所述的多肽包含由序列編號212的氨基酸序列構成的區域。

3.根據權利要求2所述的基因修飾微生物，其中，在所述序列編號212的氨基酸序列中，從N末端側起的第13個氨基酸殘基是苯丙氨酸或亮氨酸，從N末端側起的第15個氨基酸殘基是亮氨酸或谷氨酰胺，從N末端側起的第16個氨基酸殘基是賴氨酸或天冬酰胺，從N末端側起的第17個氨基酸殘基是甘氨酸或絲氨酸，從N末端側起的第19個氨基酸殘基是脯氨酸或精氨酸，從N末端側起的第21個氨基酸殘基優選為亮氨酸、蛋氨酸或纈氨酸。

4.根據權利要求1至3中任一項所述的基因修飾微生物，其是選自由埃希氏菌屬、沙雷氏菌屬、哈夫尼菌屬及假單胞菌屬所組成的組中的微生物的基因修飾體。

5.根據權利要求1至4中任一項所述的基因修飾微生物，其具有由乙酰-輔酶A及琥珀酰-輔酶A生成3-氧代己二酰輔酶A和輔酶A的能力以及由3-羥基己二酰-輔酶A生成3-羥基己二酸的能力。

6.根據權利要求1至4中任一項所述的基因修飾微生物，其具有由乙酰-輔酶A及琥珀酰-輔酶A生成3-氧代己二酰輔酶A和輔酶A的能力、由3-羥基己二酰-輔酶A生成2,3-脫氫己二酰-輔酶A的能力、以及由2,3-脫氫己二酰-輔酶A生成α-氫化己二烯二酸的能力。

7.根據權利要求1至4中任一項所述的基因修飾微生物，其具有由乙酰-輔酶A及琥珀酰-輔酶A生成3-氧代己二酰輔酶A和輔酶A的能力、由3-羥基己二酰-輔酶A生成2,3-脫氫己二酰-輔酶A的能力、由2,3-脫氫己二酰-輔酶A生成己二酰-輔酶A的能力、以及由己二酰-輔酶A生成己二酸的能力。

8.一種3-羥基己二酸的制造方法，包括在含有碳源作為發酵原料的培養基中培養權利要求1至5中任一項所述的基因修飾微生物。

9.一種α-氫化己二烯二酸的制造方法，包括在含有碳源作為發酵原料的培養基中培養權利要求1至4以及6中任一項所述的基因修飾微生物。

10.一種己二酸的制造方法，包括在含有碳源作為發酵原料的培養基中培養權利要求1至4以及7中任一項所述的基因修飾微生物。

11.一種制造選自由3-羥基己二酸、α-氫化己二烯二酸及己二酸組成的組中的1種以上的物質的方法，包括：在含有碳源作為發酵原料的培養基中培養導入有編碼下述多肽的核酸、或者該多肽的表達得以增強的基因修飾微生物，該多肽在沙雷氏菌屬微生物中被構成5-氨基乙酰丙酸合酶基因和基因簇的3-羥基丁酰-輔酶A脫氫酶基因所編碼。