[發明專利]將樣品中蛋白錯誤折疊疾病的蛋白聚集體定量的方法

在審

• 申請號: 201880069020.0
• 申請日: 2018-10-25
• 公開（公告）號: CN111527409A
• 公開（公告）日: 2020-08-11
• 發明（設計）人: C.扎菲烏;D.維爾博爾德;B.卡斯
• 申請（專利權）人: 于利奇研究中心有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 章敏;邵長準

1.將樣品中蛋白錯誤折疊疾病的蛋白聚集體定量的方法，

其特征在于以下步驟：

a) 將針對蛋白錯誤折疊疾病單體的捕獲分子A布置在基底上；

b) 選擇包含蛋白錯誤折疊疾病聚集體的復雜樣品，其中該聚集體在聚集體表面上具有單體表位；

c) 從樣品中去除不溶成分；

d) 使根據步驟c)的包含蛋白錯誤折疊疾病聚集體的樣品在基底的一部分上與捕獲分子A接觸，并且將其中包含的單體布置在捕獲分子A上；

e) 使校準標準在基底的另一部分上與捕獲分子A接觸并布置在其上，其中在校準標準的表面上布置著要檢測的蛋白錯誤折疊疾病的特定數量的單體；

f) 使針對蛋白錯誤折疊疾病單體的至少一種捕獲分子B與樣品的聚集體和校準標準兩者接觸，并布置到蛋白錯誤折疊疾病單體上，其中該捕獲分子B可以發出可探測的信號；

g) 將布置在樣品聚集體上的一種或多種捕獲分子B的信號與布置在校準標準上的捕獲分子B的信號進行比較，以將樣品聚集體定量，其中步驟a)至g)不必相繼進行。

2.根據前一項權利要求所述的方法，其特征在于，選擇與蛋白錯誤折疊疾病單體的相同靶區域結合的分子作為根據步驟a)的捕獲分子A和根據步驟f)的捕獲分子B。

3.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其特征在于，選擇單克隆抗體作為捕獲分子A和作為捕獲分子B。

4.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其特征在于，選擇包含至少兩種針對蛋白錯誤折疊疾病單體的單克隆抗體的捕獲分子B。

5.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其特征在于，在步驟b)中使用含有阿爾茨海默氏癡呆的β淀粉樣蛋白單體的復雜樣品。

6.根據前一項權利要求所述的方法，其特征在于，使用單克隆抗體作為步驟a)中的捕獲分子A和作為步驟f)中的捕獲分子B，它們以β淀粉樣蛋白3-8作為單體的相同靶區域。

7.根據前一項權利要求所述的方法，其特征在于，在步驟e)中，將具有蛋白錯誤折疊疾病聚集體的尺寸的顆粒用作校準標準。

8.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其特征在于，在步驟e)中，將在顆粒表面上具有要檢測的聚集體的特定數量的單體的顆粒用作校準標準。

9.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其特征在于，在步驟e)中，將具有約20nm尺寸和表面上約30個β淀粉樣蛋白單體的二氧化硅納米顆粒用作校準標準。

10.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其特征在于，在步驟b)中，選擇動物，特別是患有阿爾茨海默氏癡呆的轉基因小鼠的腦勻漿作為復雜樣品。

11.用于將復雜樣品中蛋白錯誤折疊疾病的蛋白聚集體定量的裝置，其特征在于，其包括基底，在該基底上布置有對于蛋白錯誤折疊疾病單體的捕獲分子A，并且在基底的一部分上在捕獲分子A上布置著具有蛋白錯誤折疊疾病的特定數量的單體的顆粒作為校準標準，所述特定數量對應于要檢測的聚集體中的單體表位的數量，并且在基底的另一部分上，捕獲分子A為來自復雜樣品的蛋白錯誤折疊疾病單體提供結合位點。

12.根據前一項權利要求所述的裝置，其特征在于，布置具有要檢測的聚集體的尺寸的顆粒作為校準標準。

13.根據前兩項權利要求中任一項所述的裝置，其特征在于，二氧化硅納米顆粒作為校準標準。

14.根據前三項權利要求中任一項所述的裝置，其特征在于，微量滴定板作為基底，其中所述微量滴定板具有至少一個反應室，在其底部上布置著校準標準，該校準標準布置在捕獲分子A上，并且所述裝置具有至少一個另外的反應室，在其底部上布置著對于要檢測的樣品聚集體的捕獲分子A。