[發明專利]使用可調節內含子的表達控制

在審

• 申請號: 201880068443.0
• 申請日: 2018-08-22
• 公開（公告）號: CN111566216A
• 公開（公告）日: 2020-08-21
• 發明（設計）人: 格拉哈姆·懷特西德
• 申請（專利權）人: 塞普洛麥克斯有限公司
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 鄭斌;劉振佳

1.用于在細胞中產生表達產物的合成核酸表達構建體，所述核酸表達構建體包含與編碼所述表達產物的核酸序列有效連接的啟動子序列，編碼所述表達產物的所述核酸序列包含編碼可調節內含子的序列，所述可調節內含子是包含可切除序列的內含子，所述可切除序列能夠通過細胞中的未折疊蛋白反應(UPR)體系從所述合成表達構建體產生的轉錄物中剪接出去/剪接掉，從而產生編碼功能性表達產物的轉錄物。

2.權利要求1所述的合成核酸表達構建體，其中所述可調節內含子能夠被IRE1蛋白或者其同源物或直系同源物剪接掉。

3.權利要求1或2所述的合成核酸表達構建體，其中所述表達產物是蛋白質。

4.前述權利要求中任一項所述的合成核酸表達構建體，其中剪接掉所述可調節內含子的可切除序列允許來自編碼所述表達產物的核酸序列的轉錄物正確翻譯，從而允許產生所期望的表達產物。

5.前述權利要求中任一項所述的合成核酸表達構建體，其中所述內含子在來自編碼所述表達產物的核酸序列的轉錄物中的存在導致從所述轉錄物中翻譯出無功能的蛋白質。

6.前述權利要求中任一項所述的合成核酸表達構建體，其中剪接掉所述可調節內含子的所述可切除序列消除所述轉錄物中的提前終止密碼子。

7.前述權利要求中任一項所述的合成核酸表達構建體，其中剪接掉所述可調節內含子的所述可切除序列導致所述轉錄物中位于所述可調節內含子下游的序列發生閱讀框移位。

8.前述權利要求中任一項所述的合成核酸表達構建體，其中所述可切除序列的核苷酸長度不可被3整除。

9.前述權利要求中任一項所述的合成核酸表達構建體，其中所述可調節內含子包含序列CNG/CNG-Xn-CNG/CNG，其中Xn代表長度為n個堿基的序列，其中/代表切割位點，并且其中序列CNG-Xn-CNG從所述轉錄物中切除。

10.權利要求9所述的合成核酸表達構建體，其中Xn的長度為10至500個核苷酸，更優選15至350個核苷酸，更優選15至100個核苷酸，更優選15至35個核苷酸，更優選20至25個核苷酸。

11.前述權利要求中任一項所述的合成核酸表達構建體，其中所述可調節內含子包含序列CNG/CNG-Xn-CNG/CNG[CG]，其中Xn代表長度為n個核苷酸的序列，其中/代表切割位點，使得在剪接時可切除序列CNG-Xn-CNG從所述轉錄物中切除，其中序列Xn的5’端的核苷酸為C或G。

12.權利要求9至11中任一項所述的合成核酸表達構建體，其中Xn包含序列CACUCAGACUACGUGCACCU(SEQ ID NO：1)或與其至少60％相同的序列。

13.權利要求12所述的合成核酸表達構建體，其中Xn包含以下序列之一或由其組成：

-CACUCAGACUACGUGCACCU(SEQ ID NO：1)；

-CACUCAGACUACGUGCUCCU(SEQ ID NO：2)；

-CACUCAGACUACGUGCCCCU(SEQ ID NO：3)；

-CACUCAGACUACGUGCGCCU(SEQ ID NO：4)；和

-CACUCAGACUAUGUGCACCU(SEQ ID NO：5)。

14.前述權利要求中任一項所述的合成核酸表達構建體，其中所述可調節內含子包含序列CNG/CNGCACUCAGACUACGUGCACCUCNG/CNGC(SEQ ID NO：6)，或與其至少60％相同的序列。