[發(fā)明專利]用于組織保存的方法和組合物在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201880066897.4 | 申請日： | 2018-08-27 |
| 公開（公告）號： | CN111372450A | 公開（公告）日： | 2020-07-03 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | R·麥金太爾;M·麥卡納 | 申請（專利權(quán)）人： | 福姆62有限責(zé)任公司 |
| 主分類號： | A01N1/00 | 分類號： | A01N1/00;A01N1/02 |
| 代理公司： | 北京市鑄成律師事務(wù)所 11313 | 代理人： | 劉文娜;郗名悅 |
| 地址： | 美國加利*** | 國省代碼： | 暫無信息 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 用于 組織 保存 方法 組合 | ||
本文描述了保存受試者的組織如腦或其部分的方法。該方法包括通過用包括水性溶液的洗滌液灌注組織來洗滌組織；通過用包括醛的固定液灌注組織來固定組織；以及通過用包括玻璃化劑的冷凍保護(hù)液灌注組織來冷凍保護(hù)組織。洗滌液、固定液和/或冷凍保護(hù)液可包括染料或造影劑以監(jiān)控液體通過組織的灌注。在某些實(shí)施方式中，冷凍保護(hù)液具有約?80℃或更高的玻璃化溫度。洗滌液可進(jìn)一步包括一種或多種離子通道封阻劑、鈣螯合劑、血栓溶解劑、抗血小板藥、呼吸毒藥或突觸毒藥。本文還描述了分析保存的組織的方法。
相關(guān)申請的交叉引用
本申請要求2017年8月28日提交的美國臨時(shí)專利申請No.62/550,945的優(yōu)先權(quán)權(quán)益，其全部內(nèi)容通過引用納入本文。
技術(shù)領(lǐng)域
本文描述的發(fā)明涉及組織，特別地腦組織保存的方法和組合物(composition)。
背景技術(shù)
固定和保存組織以維持結(jié)構(gòu)的能力對于長期研究中維持臨床和科學(xué)組織樣本很重要。包括來自人類和非人類(如嚙齒動(dòng)物)來源的全腦庫(whole brain banking)的神經(jīng)組織，對于研究許多腦疾病如阿爾茨海默氏病(Alzheimer’disease)特別重要。參見，例如Samarasekera等，Brain banking for neurological disorders，Lancet Neurology，第12卷，第11期，第1096頁-第1105頁(2013)。
不幸地，自1960年代以來，腦庫技術(shù)沒有很大變化。人腦通常在持續(xù)16-36小時(shí)的長時(shí)間缺血性延遲后，通常通過浸泡在福爾馬林中保存。不幸地，缺血性延遲(血流停滯)、福爾馬林固定以及基于緩慢擴(kuò)散的固定劑滲透的該組合甚至在樣本被分析前導(dǎo)致大量的超微結(jié)構(gòu)損壞和蛋白質(zhì)和/或RNA的損失。
保存腦的其他方法包括用醛灌注腦并且在相對溫暖的溫度(如約4℃)儲存固定的腦。然而，由于固定的腦保持化學(xué)活性并且能夠經(jīng)歷化學(xué)和形態(tài)學(xué)降解，因此該技術(shù)不保證長期儲存腦的超微結(jié)構(gòu)的靜態(tài)保存。在零下溫度固定的腦的儲存用作抑制化學(xué)降解，但是冰的形成會導(dǎo)致腦的超微結(jié)構(gòu)顯著脫水和機(jī)械損壞。
最近開發(fā)的被稱為醛穩(wěn)定化冷凍保存(ASC)的用于動(dòng)物腦的保存的技術(shù)，有望大大提高保存腦的保存質(zhì)量和儲存時(shí)間。參見McIntyreFahy，Aldehyde-stabilizedcryopreservation(醛穩(wěn)定化冷凍保存)，Cryobiology，第71卷，第448頁-第458頁(2015)。ASC通過灌注遞送戊二醛，使得能夠快速固定所有的腦結(jié)構(gòu)。然后引入冷凍保護(hù)劑，使得能夠在非常低的溫度長期儲存。ASC方法仍然有許多缺陷，包括結(jié)構(gòu)質(zhì)量、儲存溫度和質(zhì)量控制。例如，用固定液灌注組織可導(dǎo)致肌肉或組織收縮或水腫，其限制液體灌注到毛細(xì)血管床中。另外，使用ASC方法保存可導(dǎo)致細(xì)胞外空間的損失、錨定的神經(jīng)遞質(zhì)囊泡的損失、髓磷脂的釋放(unraveling)、細(xì)胞骨架的重組和整體組織皺縮。
本文所涉及的所有出版物、專利和專利申請的公開內(nèi)容均通過引用方式全部納入本文。
發(fā)明內(nèi)容
本文描述了保存組織(如腦)的方法以及分析保存的組織的方法。本文還描述了可以用于保存組織的洗滌液(wash fluid)、固定液和冷凍保護(hù)液。
在一個(gè)方面中，保存受試者組織的方法包括：通過用包括水性液體(如鹽水(saline)或緩沖鹽水)的洗滌液灌注組織來洗滌組織；通過用包括醛的固定液灌注組織來固定組織；以及通過用包括玻璃化劑的冷凍保護(hù)液灌注組織來冷凍保護(hù)組織；其中洗滌液、固定液或冷凍保護(hù)液包括染料或造影劑。
在另一個(gè)方面中，保存受試者組織的方法包括：通過用包括水性液體(如鹽水或緩沖鹽水)的洗滌液灌注組織來洗滌組織；通過用包括醛的固定液灌注組織來固定組織；通過用包括玻璃化劑的冷凍保護(hù)液灌注組織來冷凍保護(hù)組織，冷凍保護(hù)液具有約-80℃或更高的玻璃化溫度。
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