[發明專利]免疫球蛋白結合蛋白質和使用其的親和載體

在審

• 申請號: 201880061738.5
• 申請日: 2018-09-25
• 公開（公告）號: CN111108113A
• 公開（公告）日: 2020-05-05
• 發明（設計）人: 安岡潤一;吉村貴一;芳賀智亮
• 申請（專利權）人: JSR株式會社;JSR生命科學株式會社;JSR微有限公司;JSR微公司
• 主分類號: C07K14/195
• 分類號: C07K14/195;B01D15/38;B01J20/24;B01J20/30;C07K1/22;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C12N5/10;C12N15/31;C12N15/63;C12P21/02
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 左嘉勛;顧晉偉

本發明提供在酸性條件下的抗體解離率提高的源自蛋白L的免疫球蛋白結合蛋白質和使用其的親和載體。所述免疫球蛋白結合蛋白質至少包含1個免疫球蛋白結合結構域的變異體，以及所述親和載體包含固相載體，所述固相載體結合有該免疫球蛋白結合蛋白質。該免疫球蛋白結合結構域的變異體由與序列號1～9的任一個所示的氨基酸序列具有至少85％的同源性且具有賦予的變異的氨基酸序列構成，具有免疫球蛋白κ鏈結合活性。

技術領域

本發明涉及免疫球蛋白結合蛋白質、使用其的親和載體以及使用該親和載體的抗體或其片段的分離方法。

背景技術

抗體近年來被廣泛利用于研究用試劑、抗體醫藥等。這些試劑、醫藥用的抗體通常通過親和色譜進行純化。抗體的親和純化通常使用固定化有作為與免疫球蛋白特異性結合的物質的配體的柱。該配體通常使用蛋白A、蛋白G、蛋白L等免疫球蛋白結合蛋白質。

抗體的親和純化中，一般而言，首先在中性條件下使抗體吸附于柱后，通過清洗而除去雜質，接著將柱曝露于酸性條件，使所吸附的抗體從配體解離、洗脫。對于抗體的洗脫，由于在強酸性條件下抗體有時受到變性等損傷，因此，優選盡可能在溫和的酸性條件下進行。另一方面，在溫和的酸性條件下時，抗體不易從柱洗脫，因此，抗體的純化效率降低。期望改善在溫和的酸性條件下抗體從親和柱的解離行為。

蛋白A是從相對較早一直使用的配體蛋白質，提高在溫和的酸性條件下的抗體解離行為的技術也從較早一直在研究。例如，在專利文獻1中，通過對蛋白質A的E結構域導入部位特異性突變，提高在較溫和的酸性條件(pH4.5附近)下的抗體解離行為。

蛋白L由于與免疫球蛋白輕鏈κ結構域結合，因此，使用于Fab、單鏈抗體(scFv)等低分子抗體的純化。關于改變為親和配體用的蛋白L的報告少。例如，專利文獻2和3中記載了包含蛋白L的結構域或其變異體的免疫球蛋白κ鏈結合性多肽。專利文獻4中記載了具有蛋白L的免疫球蛋白輕鏈κ結構域結合性肽的選自氨基酸序列的15位、16位、17位和18位中的1個以上的氨基酸殘基被取代的氨基酸序列且其酸解離pH與取代導入前相比移至中性側的免疫球蛋白κ鏈可變區域結合性肽。專利文獻5中記載了包含在蛋白L的免疫球蛋白結合結構域的氨基酸序列中選自第7位、第13位、第22位和第29位中的部位的至少2個以上被賴氨酸以外的堿性氨基酸或具有羥基的氨基酸取代的氨基酸序列的免疫球蛋白結合結構域的堿穩定性優異。

現有技術文獻

專利文獻

專利文獻1：日本專利第5229888號公報

專利文獻2：國際公開公報第2016/096643號

專利文獻3：美國專利第6884629號公報

專利文獻4：國際公開公報第2016/121703號

專利文獻5：國際公開公報第2017/069158號

發明內容

以往的親和載體在溫和的酸性條件下抗體的純化效率不充分，尋求一種用于作為親和配體使用的在溫和的酸性條件下的抗體解離率提高的源自蛋白L的免疫球蛋白結合結構域。本發明提供在溫和的酸性條件下的抗體解離率提高的包含源自蛋白L的免疫球蛋白結合結構域的變異體的免疫球蛋白結合蛋白質和使用其的親和載體。

本發明提供以下內容。

一種免疫球蛋白結合蛋白質，包含至少1個免疫球蛋白結合結構域的變異體，

該免疫球蛋白結合結構域的變異體由與序列號1～9的任一個所示的氨基酸序列具有至少85％的同源性的氨基酸序列且具有選自以下的(a)～(n)中的至少1個變異的氨基酸序列構成，具有免疫球蛋白κ鏈結合活性：

(a)相當于序列號9所示的氨基酸序列的16位的位置的氨基酸殘基取代為其它氨基酸殘基或缺失，或者在該位置之前或之后的位置插入氨基酸殘基；