[發明專利]工程化且完全-功能定制的糖蛋白

在審

• 申請號: 201880056874.5
• 申請日: 2018-06-28
• 公開（公告）號: CN111108211A
• 公開（公告）日: 2020-05-05
• 發明（設計）人: 阿米爾禮薩·法里德莫亞耶;曼紐拉·瑪莉;瑞納·福拉多爾
• 申請（專利權）人: 利瑪泰克生物制品公司
• 主分類號: C12P21/00
• 分類號: C12P21/00;C12N1/00
• 代理公司: 北京安信方達知識產權代理有限公司 11262
• 代理人: 武晶晶

1.利什曼蟲(Leishmania)宿主細胞，其包含：

a.編碼靶標蛋白的重組核酸；和

b.編碼異源糖基轉移酶的重組核酸。

2.根據權利要求1所述的宿主細胞，其中所述異源糖基轉移酶是N-乙酰氨基葡萄糖轉移酶；和/或異源半乳糖基轉移酶；和/或異源唾液酸轉移酶。

3.根據權利要求2所述的宿主細胞，其中所述宿主細胞包含兩種或更多種N-乙酰氨基葡萄糖轉移酶；和/或兩種或更多種異源半乳糖基轉移酶；和/或兩種或更多種異源唾液酸轉移酶。

4.根據權利要求1至3中任一項所述的宿主細胞，其中所述包含異源唾液酸轉移酶的宿主細胞還包含能夠產生CMP-NeuAc的異源CMP-Sia生物合成途徑蛋白。

5.根據權利要求1至4中任一項所述的宿主細胞，其中來自N-聚糖生物合成途徑的一種或多種內源酶已缺失、突變和/或功能性失活。

6.根據權利要求1至4中任一項所述的宿主細胞，其中所述利什曼蟲(Leishmania)細胞是蜥蜴利什曼蟲(Leishmania tarentolae)細胞。

7.根據權利要求2至6中任一項所述的宿主細胞，其中所述N-乙酰氨基葡萄糖轉移酶、半乳糖基轉移酶和/或唾液酸轉移酶的氨基酸序列來源于表9中所列的N-乙酰氨基葡萄糖轉移酶、半乳糖基轉移酶或唾液酸轉移酶，或其功能同源物、同工型或變體。

8.根據權利要求1至7中任一項所述的宿主細胞，其中將利什曼蟲(Leishmania)信號和/或保留序列加入至所述N-乙酰氨基葡萄糖轉移酶、半乳糖基轉移酶和/或唾液酸轉移酶，其中所述信號序列將所述N-乙酰氨基葡萄糖轉移酶、半乳糖基轉移酶和/或唾液酸轉移酶靶向利什曼蟲(Leishmania)宿主細胞的內質網，并且其中所述保留序列將所述N-乙酰氨基葡萄糖轉移酶、半乳糖基轉移酶和/或唾液酸轉移酶保留在高爾基體中。

9.根據權利要求4至8中任一項所述的宿主細胞，其中所述能夠產生CMP-NeuAc的CMP-Sia生物合成途徑蛋白與表11中所列的CMP-Sia生物合成途徑蛋白至少約70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一或是其任何功能同源物、同工型或變體。

10.根據權利要求1至9中任一項所述的宿主細胞，其中所述N-乙酰氨基葡萄糖轉移酶是GnT-I。

11.根據權利要求1至9中任一項所述的宿主細胞，其中所述N-乙酰氨基葡萄糖轉移酶是GnT-II。

12.根據權利要求1至9中任一項所述的宿主細胞，其中所述N-乙酰氨基葡萄糖轉移酶是GnT-I和GnT-II。

13.根據權利要求1至9中任一項所述的宿主細胞，其中所述半乳糖基轉移酶是B4GALT1。

14.根據權利要求1至9中任一項所述的宿主細胞，其中所述N-乙酰氨基葡萄糖轉移酶是GnT-I和GnT-II，并且所述半乳糖基轉移酶是B4GALT1。

15.根據權利要求1至9中任一項所述的宿主細胞，其中所述唾液酸轉移酶是2,6-SiaT或者2,3-SiaT。

16.根據權利要求1至9中任一項所述的宿主細胞，其中所述N-乙酰氨基葡萄糖轉移酶是GnT-I和GnT-II，所述半乳糖基轉移酶是B4GALT1，并且所述唾液酸轉移酶是2,6-SiaT或2,3-SiaT。