[發(fā)明專利]修飾型脂肪酶及其用途

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201880055881.3
• 申請(qǐng)日: 2018-08-17
• 公開（公告）號(hào): CN111032872A
• 公開（公告）日: 2020-04-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吉田和典;高橋哲也;石川一彥
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天野酶制品株式會(huì)社
• 主分類號(hào): C12N15/55
• 分類號(hào): C12N15/55;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C12N9/20
• 代理公司: 北京集佳知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 金世煜;李書慧

1.一種修飾型脂肪酶，具有在序列號(hào)1的氨基酸序列中含有選自T130C-S153C、A249P、F259Y、S282P、S283Y和S300P中的一個(gè)或兩個(gè)以上的氨基酸取代的氨基酸序列或與該氨基酸序列顯示90％以上同源性的氨基酸序列，所述修飾型脂肪酶與由序列號(hào)1的氨基酸序列構(gòu)成的脂肪酶相比，高溫下的反應(yīng)性和/或穩(wěn)定性提高。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的修飾型脂肪酶，其中，修飾型脂肪酶的氨基酸序列中含有的氨基酸取代為T130C-S153C或S283Y，高溫下的反應(yīng)性提高。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的修飾型脂肪酶，其中，修飾型脂肪酶的氨基酸序列中含有的氨基酸取代為A249P、S283Y或S300P，高溫下的穩(wěn)定性提高。

4.一種脂肪酶，是序列號(hào)2～7中任一個(gè)氨基酸序列或與該氨基酸序列顯示90％以上同源性的氨基酸序列，所述脂肪酶與由序列號(hào)1的氨基酸序列構(gòu)成的脂肪酶相比高溫下的反應(yīng)性和/或穩(wěn)定性提高，其中，同源性的基準(zhǔn)為序列號(hào)2的氨基酸序列的情況下在130位半胱氨酸和153位半胱氨酸以外的位置產(chǎn)生氨基酸序列的不同，同源性的基準(zhǔn)為序列號(hào)3的氨基酸序列的情況下在249位脯氨酸以外的位置產(chǎn)生氨基酸序列的不同，同源性的基準(zhǔn)為序列號(hào)4的氨基酸序列的情況下在259位酪氨酸以外的位置產(chǎn)生氨基酸序列的不同，同源性的基準(zhǔn)為序列號(hào)5的氨基酸序列的情況下在282位脯氨酸以外的位置產(chǎn)生氨基酸序列的不同，同源性的基準(zhǔn)為序列號(hào)6的氨基酸序列的情況下在283位酪氨酸以外的位置產(chǎn)生氨基酸序列的不同，同源性的基準(zhǔn)為序列號(hào)7的氨基酸序列的情況下在300位脯氨酸以外的位置產(chǎn)生氨基酸序列的不同。

5.一種基因，編碼權(quán)利要求1～4中任一項(xiàng)所述的修飾型脂肪酶。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的基因，其中，含有序列號(hào)8～19中任一個(gè)堿基序列。

7.一種重組DNA，含有權(quán)利要求5或6所述的基因。

8.一種微生物，保有權(quán)利要求7所述的重組DNA。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的微生物，其中，宿主是大腸桿菌、柱狀假絲酵母、米曲霉、枯草芽孢桿菌或畢赤酵母菌。

10.一種酶制劑，包含權(quán)利要求1～4中任一項(xiàng)所述的修飾型脂肪酶。

11.一種油脂的分解方法，其特征在于，使權(quán)利要求1～4中任一項(xiàng)所述的酶或權(quán)利要求10所述的酶制劑作用于油脂，進(jìn)行酶反應(yīng)。

12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的分解方法，其中，在30℃～70℃下進(jìn)行酶反應(yīng)。

13.一種修飾型脂肪酶的制備方法，包括以下的步驟(I)～(III)：

(I)準(zhǔn)備編碼序列號(hào)2～7中任一個(gè)氨基酸序列的核酸的步驟；

(II)使上述核酸表達(dá)的步驟，以及

(III)回收表達(dá)產(chǎn)物的步驟。