[發明專利]因子VIII亞種的純化

在審

• 申請號: 201880054300.4
• 申請日: 2018-06-22
• 公開（公告）號: CN111183151A
• 公開（公告）日: 2020-05-19
• 發明（設計）人: M·哈斯拉赫爾;M·費丁格;P·M·貝恩塔勒;C·邁爾;B·賴佩特;M·馬柳薩斯卡斯;J·安森伯格
• 申請（專利權）人: 百深公司;百深有限責任公司
• 主分類號: C07K14/755
• 分類號: C07K14/755;A61K38/37;B01D15/08;B01D15/30;B01D15/34;B01D15/36
• 代理公司: 上海華誠知識產權代理有限公司 31300
• 代理人: 湯國華

1.一種從包含FVIII的組合物中純化因子VIII(FVIII)亞種的方法，所述方法包括以下步驟：

(1)對包含FVIII的組合物進行陰離子交換色譜，并收集包含所述FVIII亞種的洗脫液；

(2)對包含所述FVIII亞種的步驟(1)的洗脫液進行尺寸排阻色譜，并收集包含所述FVIII亞種的洗脫液；以及

(3)對包含所述FVIII亞種的步驟(2)的洗脫液進行濃縮。

2.根據權利要求1所述的方法，其中，濃縮步驟(3)是如下步驟：對包含所述FVIII亞種的步驟(2)的洗脫液進行陰離子交換色譜，并收集包含所述FVIII亞種的洗脫液。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其中，FVIII是重組FVIII(rFVIII)，所述FVIII亞種是重組FVIII(rFVIII)亞種。

4.根據權利要求1至3中任一項所述的方法，其中，所述FVIII亞種是與FVIII輕鏈連接的FVIII重鏈。

5.根據權利要求1至4中任一項所述的方法，其中，在步驟(1)中，將顆粒尺寸小于20μm的高分辨率Q樹脂用于陰離子交換色譜。

6.根據權利要求1至5中任一項所述的方法，其中，在步驟(2)中，將分辨率范圍為10000Da至60000Da的尺寸排阻色譜樹脂用于尺寸排阻色譜。

7.根據權利要求1至6中任一項所述的方法，其中，所述方法在步驟(1)之前還包括以下步驟(0)：

(0)對組合物中包含的FVIII進行弗林蛋白酶處理。

8.根據權利要求1至7中任一項所述的方法，其中，步驟(1)中的洗脫通過線性梯度洗脫進行，所述線性梯度洗脫的梯度長度為至少約16倍柱體積、至少約24倍柱體積或至少約32倍柱體積。

9.根據權利要求1至8中任一項所述的方法，其中，步驟(2)用以下步驟代替：

(2)對包含所述FVIII亞種的步驟(1)的洗脫液進行疏水相互作用色譜，所述疏水相互作用色譜為負模式色譜。

10.根據權利要求1至9中任一項所述的方法，其中，所述FVIII亞種為與FVIII輕鏈連接的FVIII 90kDa重鏈；省略所述方法的步驟(2)；在步驟(3)中，用包含所述FVIII亞種的步驟(1)的洗脫液代替包含所述FVIII亞種的步驟(2)的洗脫液。

11.一種組合物，所述組合物包含根據權利要求1至10中任一項所述的方法獲得的純化的FVIII亞種。

12.根據權利要求11所述的組合物，其中，所述組合物用于治療出血性疾病，例如血友病A。

13.一種對重組因子VIII(rFVIII)進行弗林蛋白酶處理的方法。

14.根據權利要求13所述的方法，其中，所述方法用于增加rFVIII的活性。

15.一種組合物，包含rFVIII，其中，所述rFVIII根據權利要求13或14所述的方法獲得，所述組合物用于治療出血性疾病，例如血友病A。