[發明專利]分子庫制備方法以及其組合物和用途

在審

• 申請號: 201880050920.0
• 申請日: 2018-06-29
• 公開（公告）號: CN111108215A
• 公開（公告）日: 2020-05-05
• 發明（設計）人: M·安德森;D·馬祖爾
• 申請（專利權）人: 生命技術公司
• 主分類號: C12Q1/6806
• 分類號: C12Q1/6806;C12Q1/6853
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所 11038
• 代理人: 李程達

1.一種用于制備目標核酸序列的分子庫的方法，其包含：

(a)使核酸樣品與多個銜接子接觸，所述銜接子能夠在其中所述目標核酸經歷第一擴增的條件下擴增所述樣品中的一個或多個目標核酸序列；

(b)消化所得第一擴增產物以減少或消除所得引物二聚體并制備經部分消化的目標擴增子，從而產生有間隙的雙鏈擴增子，并進而修復所述經部分消化的目標擴增子；以及

(c)使用通用引物在第二擴增中擴增所述經修復的目標擴增子，

由此產生目標核酸序列的分子庫；

其中，所述多個銜接子中的每一個均包含通用固定結構序列和目標核酸序列和可裂解部分以及任選的一個或多個標簽序列；并且其中包括至少兩個且最多十萬個目標特異性銜接子對，

其中，所述銜接子的目標核酸序列包括至少一個可裂解部分并且所述通用固定結構序列不包括所述可裂解部分。

2.根據權利要求1所述的方法，其中至少一個銜接子中包括任選的標簽序列，并且所述銜接子序列中包括側接所述標簽序列的任一個末端的可裂解部分。

3.根據權利要求1所述的方法，其中每個通用序列的熔融溫度高于所存在的每個目標核酸序列和每個標簽序列的熔融溫度。

4.根據權利要求1所述的方法，其在單一、僅添加型工作流程反應中進行，可實現高度多重化的目標分子庫的快速產生。

5.根據權利要求2所述的方法，其中所有所述銜接子包含帶有側接所述標簽序列的任一個末端的可裂解基團的標簽序列。

6.根據權利要求1或權利要求2所述的方法，其中步驟(b)的消化和修復是在單一步驟中進行的。

7.根據權利要求1所述的方法，其中所述步驟(b)的消化和修復是在不同溫度下，以短暫分開的方式進行的。

8.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述方法的一個或多個步驟是以手動模式或自動模式或其組合進行的。

9.根據權利要求8所述的方法，其中所述方法的每個步驟是以自動模式進行。

10.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其進一步包含至少一個純化步驟。

11.根據權利要求10所述的方法，其中純化步驟僅在步驟(c)之后進行。

12.根據權利要求10所述的方法，其中第一純化步驟在步驟(b)之后進行并且第二純化步驟在步驟(c)之后進行。

13.根據權利要求10所述的方法，其中分子庫由步驟(a)的所述第一擴增產生的銜接子-二聚體副產物從所得分子庫中去除。

14.根據權利要求10所述的方法，其中擴增后所得的目標核酸的富集體含有數量減少的銜接子-二聚體副產物。

15.根據權利要求14所述的方法，其中銜接子-二聚體副產物全部被消除。

16.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述能夠擴增一個或多個目標核酸序列的多個銜接子包含能夠擴增至少兩個不同目標核酸序列的多個銜接子對。

17.根據權利要求2所述的方法，其中所述多個銜接子的每個目標特異性對可包括高達16,777,216個包含不同標簽序列的不同銜接子組合。

18.根據權利要求17所述的方法，其中每個所產生的目標特異性擴增子序列包括至少1個不同序列且可高達10⁷個不同序列。