[發明專利]經修飾的Cas9蛋白及其用途

在審

• 申請號: 201880050453.1
• 申請日: 2018-05-31
• 公開（公告）號: CN110914423A
• 公開（公告）日: 2020-03-24
• 發明（設計）人: 濡木理;西增弘志;平野央人
• 申請（專利權）人: 國立大學法人東京大學
• 主分類號: C12N15/09
• 分類號: C12N15/09;C12N9/22;C12N15/55
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 張桂霞;彭昶

1. 蛋白，該蛋白由包含在SEQ ID NO: 1所表示的氨基酸序列中1335位的精氨酸被選自丙氨酸、甘氨酸、半胱氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、纈氨酸、蘇氨酸、天冬酰胺和天冬氨酸的1個氨基酸取代而得到的氨基酸序列的序列構成，并且具有與向導RNA的結合能力。

2. 權利要求1所述的蛋白，其中，在SEQ ID NO: 1所表示的氨基酸序列中，進一步在1219位具有突變。

3. 權利要求1或2所述的蛋白，其中，在SEQ ID NO: 1所表示的氨基酸序列中，進一步在1322位具有突變。

4. 蛋白，該蛋白由包含在SEQ ID NO: 1所表示的氨基酸序列中1335位的精氨酸被選自丙氨酸、甘氨酸、半胱氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、纈氨酸、蘇氨酸、天冬酰胺和天冬氨酸的1個氨基酸取代、并進一步在1219位具有突變的氨基酸序列的序列構成，并且具有與向導RNA的結合能力。

5. 蛋白，該蛋白由包含在SEQ ID NO: 1所表示的氨基酸序列中1335位的精氨酸被選自丙氨酸、甘氨酸、半胱氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、纈氨酸、蘇氨酸、天冬酰胺和天冬氨酸的1個氨基酸取代、并進一步在1322位具有突變的氨基酸序列的序列構成，并且具有與向導RNA的結合能力。

6.權利要求1～5中任一項所述的蛋白，其中，1335位的精氨酸的取代是取代成丙氨酸。

7.權利要求1～5中任一項所述的蛋白，其中，1335位的精氨酸的取代是取代成異亮氨酸、蛋氨酸、蘇氨酸或纈氨酸。

8.權利要求2或4所述的蛋白，其中，1219位的突變是谷氨酸被取代成苯丙氨酸。

9.權利要求3或5所述的蛋白，其中，1322位的突變是丙氨酸被取代成精氨酸、組氨酸或賴氨酸。

10.權利要求9所述的蛋白，其中，1322位的突變是丙氨酸被取代成精氨酸。

11. 權利要求1～10中任一項所述的蛋白，其中，在SEQ ID NO: 1所表示的氨基酸序列中，進一步在選自1111位、1135位、1218位和1337位的至少一個位置具有突變。

12. 權利要求11所述的蛋白，其中，在SEQ ID NO: 1所表示的氨基酸序列中，進一步在選自1111位、1135位、1218位和1337位的至少2個位置具有突變。

13. 權利要求11所述的蛋白，其中，在SEQ ID NO: 1所表示的氨基酸序列中，進一步在選自1111位、1135位、1218位和1337位的至少3個位置具有突變。

14. 權利要求11所述的蛋白，其中，在SEQ ID NO: 1所表示的氨基酸序列中，進一步在1111位、1135位、1218位和1337位具有突變。

15.權利要求11～14中任一項所述的蛋白，其中，

1111位的突變是亮氨酸被取代成精氨酸、組氨酸或賴氨酸；

1135位的突變是天冬氨酸被取代成纈氨酸；

1218位的突變是甘氨酸被取代成精氨酸、組氨酸或賴氨酸；

1337位的突變是蘇氨酸被取代成精氨酸、組氨酸或賴氨酸。

16. 權利要求1～15中任一項所述的蛋白，其中，在SEQ ID NO: 1的施行了突變的位置以外的位點具有80%以上的同源性。