[發明專利]生成哺乳動物T細胞活化誘導型合成啟動子(SYN+PRO)以改善T細胞療法

在審

• 申請號: 201880047704.0
• 申請日: 2018-05-15
• 公開（公告）號: CN110913871A
• 公開（公告）日: 2020-03-24
• 發明（設計）人: 魏佳;邁克爾·C·延森
• 申請（專利權）人: 西雅圖兒童醫院(DBA西雅圖兒童研究所)
• 主分類號: A61K35/17
• 分類號: A61K35/17;C12N5/0783;C12N15/113;C12N15/67;A61P35/00;C07K14/705
• 代理公司: 北京信慧永光知識產權代理有限責任公司 11290
• 代理人: 洪俊梅;楊國強

1.一種制造誘導型合成啟動子文庫的方法，所述方法包括：

篩選啟動子，其中，篩選在CAR T細胞活化后被活化的啟動子，從而產生經篩選的啟動子；

篩選轉錄因子應答元件，從而產生經篩選的轉錄因子應答元件；

制造誘導型合成啟動子文庫，所述誘導型合成啟動子文庫包含在轉錄因子應答元件的CAR T細胞活化后被活化的啟動子；以及

合成寡核苷酸，其中，所述寡核苷酸包含編碼經篩選的轉錄因子應答元件的第一序列以及編碼經篩選的啟動子的第二序列。

2.一種誘導型合成啟動子，其中，所述誘導型合成啟動子包含：

編碼轉錄因子應答元件的第一序列；以及

編碼啟動子序列的第二序列，

任選地，其中，所述誘導型合成啟動子包含SEQ ID NO:1-SEQ ID NO:33中的一個或多個。

3.如權利要求2所述的誘導型合成啟動子，其中，所述誘導型合成啟動子可通過嵌合抗原受體活化來誘導。

4.如權利要求3所述的誘導型合成啟動子，其中，所述誘導型合成啟動子可通過所述嵌合抗原受體結合至配體來誘導。

5.如權利要求2-4中任一項所述的誘導型合成啟動子，其中，所述誘導型合成啟動子可通過與抗CD3/抗CD28相互作用來誘導。

6.如權利要求2-5中任一項所述的誘導型合成啟動子，其中，所述誘導型合成啟動子可通過化學物質來誘導。

7.如權利要求6所述的誘導型合成啟動子，其中，所述化學物質為PMA或羅奴霉素。

8.如權利要求2-8中任一項所述的誘導型合成啟動子，其中，所述啟動子包含內源性IL2最小啟動子序列。

9.如權利要求2-8中任一項所述的誘導型合成啟動子，其中，所述誘導型合成啟動子包含SEQ ID NO:1-SEQ ID NO:33中任一項所示的序列。

10.如權利要求2-9中任一項所述的誘導型合成啟動子，其中，所述轉錄因子應答元件為E2F1、EGR1、HIF1A、NFAT、LEF1、SP1、PU.1、NFKB、JUN、FOS和/或STAT4。

11.一種用于分子表達的細胞，所述細胞包含：

載體，其中，所述載體包含如權利要求2-9中任一項所述的誘導型合成啟動子；編碼分子的基因；以及

編碼嵌合抗原受體的序列。

12.如權利要求11所述的細胞，其中，所述分子為蛋白質、抗體、促增殖分子或可根除腫瘤的分子。

13.如權利要求11或12所述的細胞，其中，所述細胞為造血干細胞。

14.如權利要求11-13中任一項所述的細胞，其中，所述嵌合抗原受體對CD19而言是特異性的。

15.如權利要求11-14中任一項所述的細胞，其中，所述細胞為CD8+或CD4+。

16.如權利要求11-15中任一項所述的細胞，其中，所述分子的表達是可誘導的。

17.如權利要求11-16中任一項所述的細胞，其中，所述CAR包含信號轉導結構域。

18.如權利要求17所述的細胞，其中，所述信號轉導結構域為1G、2G或3G。

19.如權利要求2-18中任一項所述的細胞，其中，所述載體為慢病毒載體、基于轉座酶的微環或納米質粒。