[發明專利]基于甲磺酸鹽的預混液

有效

• 申請號: 201880045345.5
• 申請日: 2018-06-20
• 公開（公告）號: CN110945141B
• 公開（公告）日: 2023-08-08
• 發明（設計）人: 鐘昌;J·穆勒羅;S·門琴
• 申請（專利權）人: 生命技術公司
• 主分類號: C12Q1/686
• 分類號: C12Q1/686;C12Q1/6848
• 代理公司: 中國貿促會專利商標事務所有限公司 11038
• 代理人: 李程達

本文公開了含有甲磺酸鹽的組合物、此類組合物的使用方法以及實現此類組合物的組分試劑盒，用于改進核酸的擴增，特別是在酶抑制劑存在的情況下。以上所述在法醫分析和環境分析中特別有用。本公開提供了用于克服PCR抑制的新組合物、方法和組分試劑盒。本文在一些實施例中公開的是一種PCR預混液，所述PCR預混液包含甲磺酸鹽。

技術領域

本文公開了含有甲磺酸鹽的組合物、此類組合物的使用方法以及構成此類組合物的分裝組分的試劑盒，用于改進核酸的擴增，特別是在酶抑制劑存在的情況下。

背景技術

PCR抑制劑是阻止核酸通過聚合酶鏈反應(PCR)擴增的因子。當存在足夠數量的DNA時，PCR抑制是擴增失敗的原因。PCR抑制劑通常通過與DNA相互作用或干擾DNA聚合酶來影響PCR。

法醫遺傳分析中的常見問題是PCR抑制劑的存在。由于對短串聯重復序列的擴增具有抑制作用，對于法醫而言，這些干擾物質對人類鑒定提出了挑戰。總體結果可以是無擴增產物或僅有部分擴增。

本文公開了用于克服PCR抑制，特別是在法醫分析中的組合物、方法和試劑盒。

發明內容

只要科學家使用聚合酶鏈反應(PCR)，PCR抑制劑就是成功的障礙。法醫調查中遇到的材料(如血液、織物、組織和土壤)本身就含有PCR抑制劑。本公開提供了用于此類克服PCR抑制的新的組合物、方法和組分的試劑盒。

在一些實施例中，本文所公開的是一種PCR預混液，所述PCR預混液包含甲磺酸鹽。

在一些實施例中，公開了一種分裝組分的試劑盒，所述分裝組分的試劑盒包含含有PCR預混液的容器，所述PCR預混液包含甲磺酸鹽。

在一些實施例中，公開了一種方法，所述方法包含使樣品與組合物接觸，從而形成接觸組合物，所述組合物包含生物緩沖液、甲磺酸鹽、蛋白質化合物、穩定劑化合物、脫氧核苷三磷酸、至少兩個引物和聚合酶，使接觸的組合物經歷熱循環方案，從而形成循環的接觸組合物，并使循環的接觸組合物經歷電泳分離。

其它實施例可以見于以下款項中。

1.一種PCR預混液，其包含甲磺酸鹽。

2.根據第1項所述的PCR預混液，其進一步包含穩定劑化合物。

3.根據第2項所述的PCR預混液，其中所述穩定劑化合物包含甘油或蔗糖。

4.根據第1項所述的PCR預混液，其進一步包含蛋白質化合物。

5.根據第4項所述的PCR預混液，其中所述蛋白質化合物為牛血清白蛋白。

6.根據第1項所述的PCR預混液，其進一步包含脫氧核苷三磷酸。

7.根據第1項所述的PCR預混液，其進一步包含DNA聚合酶。

8.根據第1項所述的PCR預混液，其中所述甲磺酸鹽為甲基磺酸鉀。

9.根據第1項所述的PCR預混液，其包含：Tris-甲磺酸鹽(10-50mM)、甲基磺酸鉀(30-80mM)、牛血清白蛋白(1.2-4mg/ml)和甘油(3-8％體積)。

10.根據第9項所述的PCR預混液，其進一步包含脫氧核苷三磷酸、非離子清潔劑和DNA聚合酶。

11.一種試劑盒，其包括包含預混液的第一帶蓋的管和包含引物的第二帶蓋的管，所述預混液包含甲磺酸鹽。

12.根據第11項所述的試劑盒，其中所述預混液進一步包含蛋白質化合物。

13.根據第11項所述的試劑盒，其中所述預混液進一步包含聚合酶。