[發明專利]Fcγ受體突變體

在審

• 申請號: 201880045076.2
• 申請日: 2018-09-13
• 公開（公告）號: CN111183150A
• 公開（公告）日: 2020-05-19
• 發明（設計）人: 鄭相澤;曹美京;高翔煥;黃寶拿
• 申請（專利權）人: 國民大學校產學協力團
• 主分類號: C07K14/735
• 分類號: C07K14/735;A61K47/68;G01N33/68;A61K38/00
• 代理公司: 北京柏杉松知識產權代理事務所(普通合伙) 11413
• 代理人: 王春偉;劉繼富

本公開涉及包含Fcγ受體突變體的多肽。通過用不同的氨基酸序列置換Fcγ受體的部分氨基酸序列來優化本公開的Fcγ受體突變體，以便具有對免疫球蛋白優異的選擇性結合能力，從而有效地用于延長藥物的體內半衰期、檢測和純化免疫球蛋白、并抑制器官移植排斥或預防或治療自身免疫性疾病的用途。

技術領域

本公開涉及與IgG抗體的結合能力提高的Fcγ受體突變體。

背景技術

在人免疫細胞中表達的Fcγ受體(FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIIIa)與IgG抗體的Fc區域(下部鉸鏈區域和上部CH2區域)結合。在這些Fcγ受體中，在血液中FcγRI對IgG的親和力最高。但是，由于非常差的熱穩定性和低表達水平，在醫學或工業應用中存在困難。

同時，FcγRIIa是在各種免疫細胞，例如巨噬細胞、單核細胞、中性粒細胞等的表面表達的跨膜蛋白。它是針對IgG的親和力相對較低(K_D＝約10^-6)的受體。FcγRIIa與IgG抗體的Fc區域(下部鉸鏈區域和上部CH2區域)結合，并通過細胞內信號傳導機制激活免疫細胞。

如果可以制備和應用存在于細胞外區域并且針對IgG的親和力比野生型Fcγ受體高得多的可溶性Fc-γ受體，則可以有效抑制將自體細胞識別為抗原的自身抗體與免疫細胞表面的Fcγ受體的結合。這可以明確地用于治療自身免疫性疾病，該疾病是其中自身抗體在器官中積聚且自體細胞被識別為外源抗原，從而導致炎癥的病癥。

通常，除抗體外，大多數蛋白藥物的體內保留時間短，血清半衰期不超過24小時。抗體IgG通過胞飲作用隨機進入細胞，然后釋放到中性pH的血流中，而不會通過與FcRn結合而在弱酸性pH的內體中降解。因此，其在體內保留約3周。Fcγ受體與抗體IgG結合的過程可用于開發延長蛋白藥物的血清半衰期的融合伴侶。

對針對靶疾病表現出高特異性且幾乎無副作用的蛋白藥物的需求正在穩步增長，與之一致的，在世界范圍內正在積極開展改善蛋白藥物的功效和穩定性的研究。特別是，由于蛋白藥物的血清半衰期在蛋白的作用機理、副作用程度、治療功效、生產成本、施用次數等方面起著至關重要的作用，因此世界領先的制藥公司和蛋白工程研究組積正在積極開展延長蛋白藥物半衰期的研究。

作為代表性實例，將靶蛋白用PEG(聚乙二醇)聚合物修飾，或將靶蛋白與抗體Fc或白蛋白融合以延長血清半衰期。

如果將生物相容性聚合物例如PEG綴合于靶蛋白的特異性位點或非特異性結合到幾個位點，則可以減少由于蛋白酶的降解。另外，由于分子量增加，腎臟的排泄可能減少，血液保留時間可能延長。由于Enzon在1990年開發的PEG修飾的腺嘌呤脫氨酶獲得了USFDA的批準并投放市場，因此可商購獲得10多種產品并將其用于臨床。羅氏公司用PEG聚合物修飾干擾素-α(PEG化)以用作丙型肝炎的治療劑，并將其以品牌名稱Pegasys商業化。安進公司用20kDa PEG修飾了被開發用于治療白細胞減少的非格司亭(Neupogen)的N端，以用于商業化的持續治療形式Neulasta。但是，當大量注射蛋白時，PEG部分會從體內緩慢清除。另外，據報道長期注射高分子量PEG可能引起副作用。血清穩定性與PEG的分子量密切相關。分子量為40000Da或高于40000Da的PEG不易制備，并且眾所周知的是，隨著分子量的增加，由于與蛋白的反應性低，產率降低，并且蛋白本身的滴度也迅速降低。另外，因為PEG聚合物是具有各種分子量分布的聚合物的混合物，所以與PEG綴合的蛋白治療劑是異質的，并且在生產和質量控制上造成困難。因此，迫切需要開發新的蛋白工程技術以延長蛋白藥物的血清半衰期，該技術以用例如PEG的聚合物進行形式修飾為特征。