[發明專利]用于裂解紅細胞的組合物和方法

有效

• 申請號: 201880039682.3
• 申請日: 2018-05-07
• 公開（公告）號: CN110770587B
• 公開（公告）日: 2023-10-20
• 發明（設計）人: 喬治·C·布里頓四世;謝爾蓋·古爾尼克
• 申請（專利權）人: 拜克門寇爾特公司
• 主分類號: G01N33/96
• 分類號: G01N33/96;G01N33/50
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 顧晉偉;尹玉峰

1.裂解紅細胞的方法，其包括：

使包含紅細胞和白細胞的樣品與包含固定劑的第一緩沖液接觸，

其中所述第一緩沖液的溶質濃度大于所述樣品的溶質濃度，并且其中所述樣品與所述第一緩沖液形成第一混合物；

向所述第一混合物添加第二緩沖液以形成第二混合物，

其中所述第二混合物中的溶質濃度為所述樣品的溶質濃度的至少90％，并且由此裂解所述樣品中的紅細胞。

2.權利要求1所述的方法，其中所述樣品是全血。

3.權利要求1所述的方法，其還包括在添加所述第二緩沖液的步驟之前添加鈣螯合劑，其中所述鈣螯合劑通過螯合鈣來阻斷所述紅細胞中的鈣依賴性轉運。

4.權利要求1所述的方法，其中所述第一緩沖液還包含鈣螯合劑，其中所述鈣螯合劑阻斷所述紅細胞中的鈣依賴性轉運。

5.權利要求1至4中任一項所述的方法，其中所述接觸步驟還包括將所述第一混合物孵育0.5分鐘至20分鐘的時間段。

6.權利要求1所述的方法，其中所述方法步驟還包括將所述第二混合物孵育0.5分鐘至20分鐘的第二時間段。

7.權利要求1至6中任一項所述的方法，其中所述第二緩沖液包含0×至1×PBS。

8.權利要求1至7中任一項所述的方法，其中所述第一混合物包含約0.5％至3％的甲醛、0.5mM至20mM的EDTA和1.2×至1.8×的磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)。

9.權利要求4所述的方法，其中所述第一緩沖液包含約0.5％至10％的甲醛、0.01mM至20mM的EDTA和150mM至600mM的鹽，pH 6.5至8.5。

10.權利要求9所述的方法，其中所述第一緩沖液包含1×至3×PBS。

11.權利要求1至10中任一項所述的方法，其中所述接觸步驟包括將所述第一緩沖液與所述樣品以0.2∶1至1∶1的體積比混合。

12.處理全血樣品的方法，其包括：

形成包含全血樣品、固定劑、高滲鹽水和鈣螯合劑的第一混合物，

其中所述高滲鹽水的溶質濃度大于所述全血的溶質濃度；以及

向所述第一混合物添加第二緩沖液以形成等滲的第二混合物。

13.權利要求12所述的方法，其中所述第一混合物包含0.5％至3％的甲醛和3mM至7mM的EDTA。

14.權利要求12或13所述的方法，其中所述第二混合物包含0.01％至2％的甲醛。

15.權利要求12至14中任一項所述的方法，其中所述第二緩沖液是0×至1×PBS。

16.權利要求12至15中任一項所述的方法，其還包括對所述第一混合物或所述第二混合物中的細胞進行染色，并且將裂解之后的所染色的細胞引入到細胞儀中。

17.紅細胞裂解試劑盒，其包含：

含有高滲鹽水、0.5％至10％的甲醛和0.01mM至20mM的EDTA的第一試劑，

其中所述第一試劑的溶質濃度大于全血樣品的溶質濃度；以及

含有0×至1×PBS的第二試劑。

18.權利要求17所述的紅細胞裂解試劑盒，其中所述高滲鹽水的鹽濃度為150mM至600mM并且pH為6.5至8.5。

19.權利要求17或18所述的紅細胞裂解試劑盒，其中所述第二試劑包含0×至1×PBS。