[發(fā)明專利]用于核酸靶向富集的方法和試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201880037641.0
• 申請日: 2018-02-26
• 公開（公告）號: CN110719957B
• 公開（公告）日: 2023-07-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王磬;張明
• 申請（專利權(quán)）人: 康博國際有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12Q1/6806
• 代理公司: 北京派特恩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11270
• 代理人: 王子曄;陳萬青

1.一種用于由生物樣品富集至少一個靶核酸序列的方法，包括：

制備至少一對RNA探針組，每對包括第一RNA探針組和第二RNA探針組，所述第一RNA探針組和第二RNA探針組被配置為分別靶向所述至少一個靶核酸序列中每一個的成對物段的兩條反向平行鏈，其中，所述第一RNA探針組和第二RNA探針組的任一組中的每個RNA探針用固定部分標記，所述固定部分被配置為使得能夠固定在固體載體上；以及

通過使至少一對RNA探針組中的每對中的所述第一RNA探針組和所述第二RNA探針組兩者分別與所述至少一個靶核酸序列的每一個中的成對物段的兩條反向平行鏈雜交，并通過標記在所述第一RNA探針組和第二RNA探針組的任一組中的每個RNA探針上的所述固定部分來固定至所述固體載體上，由所述生物樣品捕獲至少一個靶核酸序列的每條鏈；

其中，由所述生物樣品捕獲所述至少一個靶核酸序列的每條鏈包括：

使所述至少一對RNA探針組中的每一對中的所述第一RNA探針組和第二RNA探針組均與所述生物樣品中的至少一個靶核酸序列接觸；以及

將所述至少一對RNA探針組固定在所述固體載體上；

所述至少一對RNA探針組中的每一對中的所述第一RNA探針組和第二RNA探針組中的任一組中的每個RNA探針長度為100-150nt，其中：

使所述至少一對RNA探針組中的每一對中的所述第一RNA探針組和第二RNA探針組均與所述生物樣品中的至少一個靶核酸序列接觸在62-70℃的溫度下進行，并進行6-24小時。

2.權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述至少一對RNA探針組中的一對或更多對是通過化學(xué)合成制備的，并且所述制備至少一對RNA探針組包括：

進行化學(xué)合成反應(yīng)，從而獲得所述至少一對RNA探針組中的一對或更多對，

其中，在所述化學(xué)合成反應(yīng)期間，所述至少一對RNA探針組中的一對或更多對中的每一對中的每個RNA探針用所述固定部分標記。

3.權(quán)利要求2所述的方法，其中，在所述化學(xué)合成反應(yīng)期間，所述固定部分共價附著到所述固體載體上。

4.權(quán)利要求2所述的方法，其中，在所述化學(xué)合成反應(yīng)后，所述至少一對RNA探針組中的一對或更多對中的每一對中的每個RNA探針用所述固定部分標記，并且所述制備至少一對RNA探針組進一步包括：

進行標記反應(yīng)，使得所述至少一對RNA探針組中的一對或更多對中的每一對中的每個RNA探針用所述固定部分標記。

5.權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述至少一對RNA探針組中的一對或更多對是通過轉(zhuǎn)錄制備的，并且所述制備至少一對RNA探針組包括：

進行轉(zhuǎn)錄反應(yīng)從而獲得所述至少一對RNA探針組中的一對或更多對，

其中，所述進行轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，從而獲得所述至少一對RNA探針組中的一對或更多對包括：

進行轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，使得在每個所述轉(zhuǎn)錄反應(yīng)期間，所述至少一對RNA探針對中的一對或更多對中的任一對中的每個RNA探針用所述固定部分標記。

6.權(quán)利要求5所述的方法，其中，每個所述轉(zhuǎn)錄反應(yīng)在標記有所述固定部分的NTP的存在下進行，其中所述NTP包括ATP、UTP、GTP和CTP中的至少一種。

7.權(quán)利要求6所述的方法，其中，所述標記有所述固定部分的NTP包括經(jīng)生物素標記的UTP。

8.權(quán)利要求7所述的方法，其中，在每個所述轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中存在的所有UTP中，所述生物素標記的UTP的相對摩爾百分比為2％-100％。

9.權(quán)利要求5所述的方法，其中，在每個所述轉(zhuǎn)錄反應(yīng)后，所述至少一對RNA探針組中的一對或更多對中的任一對中的每個RNA探針用所述固定部分標記，并且所述進行轉(zhuǎn)錄反應(yīng)從而獲得所述至少一對RNA探針組的一對或更多對包括：

進行所述轉(zhuǎn)錄反應(yīng)；以及

進行標記。