[發明專利]用于合成含有N-取代氨基酸的肽的方法

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• 申請號: 201880036609.0
• 申請日: 2018-06-08
• 公開（公告）號: CN110799520A
• 公開（公告）日: 2020-02-14
• 發明（設計）人: 野村研一;村岡照茂;棚田干將;江村岳
• 申請（專利權）人: 中外制藥株式會社
• 主分類號: C07K1/06
• 分類號: C07K1/06;C07K11/02;A61K38/12;C40B50/14
• 代理公司: 11021 中科專利商標代理有限責任公司
• 代理人: 張國梁;張瑩

1.生產包含至少一個N-取代的氨基酸或N-取代的氨基酸類似物的肽的方法，其中所述方法包括以下步驟：

1)制備包含以下官能團i)和ii)中至少一個的氨基酸(Fmoc保護的氨基酸)、包含以下i)和ii)中至少一個的氨基酸類似物(Fmoc保護的氨基酸類似物)、或包含Fmoc保護的氨基酸和Fmoc保護的氨基酸類似物之一或二者的肽(Fmoc保護的肽)：

i)被至少一個具有Fmoc骨架的保護基保護的主鏈氨基；和

ii)至少一個游離羧酸基或活性酯化羧酸基；

2)將步驟1)中制備的Fmoc保護的氨基酸、Fmoc保護的氨基酸類似物或Fmoc保護的肽支持到固相上；

3)通過使用堿以暴露其氨基，將支持在固相上的Fmoc保護的氨基酸、Fmoc保護的氨基酸類似物或Fmoc保護的肽的具有Fmoc骨架的保護基脫保護；

4)通過添加新的Fmoc保護的氨基酸、新的Fmoc保護的氨基酸類似物或新的Fmoc保護的肽，形成酰胺鍵；和

5)在比TFA弱的酸性條件下，將步驟4)中獲得的肽從固相切下。

2.權利要求1的生產方法，其中，構成步驟4)中獲得的肽的氨基酸或氨基酸類似物的至少一個側鏈被保護基保護，所述保護基在堿性條件下不脫保護，但被第一酸脫保護，并且其中，所述方法進一步包括在步驟5)之前或之后，使用所述第一酸使所述保護基脫保護的步驟；和

其中在步驟5)中，使用第二酸將所述肽切下，和

其中所述第一酸和所述第二酸均為比TFA更弱的酸，并且所述第一酸的酸度高于所述第二酸的酸度。

3.生產包含至少一個N-取代的氨基酸或N-取代的氨基酸類似物的肽的方法，其中所述方法包括以下步驟：

1)制備包含以下官能團i)和ii)中至少一個的氨基酸(Fmoc保護的氨基酸)、包含以下官能團i)和ii)中至少一個的氨基酸類似物(Fmoc保護的氨基酸類似物)、或包含Fmoc保護的氨基酸和Fmoc保護的氨基酸類似物之一或二者的肽(Fmoc保護的肽)：

i)被至少一個具有Fmoc骨架的保護基保護的主鏈氨基；和

ii)至少一個游離羧酸基或活性酯化羧酸基；

2)通過使用堿以暴露其氨基，將Fmoc保護的氨基酸、Fmoc保護的氨基酸類似物或Fmoc保護的肽的具有Fmoc骨架的保護基脫保護；

3)通過添加新的Fmoc保護的氨基酸、新的Fmoc保護的氨基酸類似物或新的Fmoc保護的肽形成酰胺鍵，其中構成在該步驟中獲得的肽的氨基酸或氨基酸類似物的至少一個側鏈具有保護基,所述保護基在堿性條件下不脫保護,并且在具有比TFA更弱的酸性的條件下脫保護；和

4)在具有比TFA更弱的酸性的條件下，將所述側鏈的保護基脫保護。

4.權利要求3的生產方法，其中肽生產是通過固相方法進行的。

5.權利要求4的生產方法，其進一步包括在步驟4)之前或之后，在比步驟4)中使用的弱酸性條件更弱的條件下，從固相上切下步驟3)中獲得的肽的步驟。

6.權利要求3的生產方法，其中肽生產是通過液相方法進行的。

7.權利要求1-6中任一項的生產方法，其中權利要求1的步驟4)或權利要求3的步驟3)進一步包含以下步驟：

通過使用堿以暴露其氨基，將新添加的Fmoc保護的氨基酸、新添加的Fmoc保護的氨基酸類似物或新添加的Fmoc保護的肽上具有Fmoc骨架的保護基脫保護；

通過進一步添加新的Fmoc保護的氨基酸、新的Fmoc保護的氨基酸類似物或新的Fmoc保護的肽，形成酰胺鍵,

并且其中這些步驟重復一次或多次。

8.權利要求1-7中任一項的生產方法，其中所制備的肽在其C末端側包含含有一個反應位點的氨基酸殘基或氨基酸類似物殘基，并且在其N末端側包含含有另一個反應位點的氨基酸殘基、氨基酸類似物殘基或羧酸類似物。

9.權利要求8的生產方法，其進一步包括使所述反應位點和所述另一反應位點鍵合以環化所述肽的步驟。