[發明專利]多重核酸擴增測定

在審

• 申請號: 201880034007.1
• 申請日: 2018-05-25
• 公開（公告）號: CN110621783A
• 公開（公告）日: 2019-12-27
• 發明（設計）人: S.G.威爾
• 申請（專利權）人: 豪夫邁·羅氏有限公司
• 主分類號: C12Q1/6818
• 分類號: C12Q1/6818
• 代理公司: 72001 中國專利代理(香港)有限公司
• 代理人: 權陸軍;黃希貴

1.一種用于檢測單個樣品容器中的多種靶核酸的方法，所述方法包括以下步驟：

（a）使懷疑含有多種靶核酸的樣品與（i）包括第一標記的探針和第一引物的第一引物/探針組和（ii）包括第二標記的探針和第二引物的第二引物/探針組接觸，其中所述第一引物于第一溫度與所述多種靶核酸中的靶核酸退火且所述第二引物于第二溫度與所述多種所述靶核酸中的另外的核酸退火，并且所述第一溫度高于所述第二溫度；

（b）在擴增反應中擴增所述樣品中的所述多種靶核酸，所述擴增反應包括至少兩步退火/延伸溫度分布，其包括第一步驟和第二步驟，所述第一步驟包括所述第一溫度，且所述第二步驟包括所述第二溫度；

（c）分別在至少一部分所述退火/延伸溫度分布上順序檢測來自所述第一和第二標記的可檢測信號；和

（d）測量所述多種靶核酸中每種靶核酸的相對量。

2.權利要求1的方法，其中所述第一和第二標記的探針各自用相同的報道分子部分標記。

3.權利要求2的方法，其中所述報道分子部分是熒光的。

4.權利要求1-3中任一項的方法，其中所述第一和第二標記的探針各自用報道分子部分和猝滅劑部分標記。

5.權利要求4的方法，其中所述報道分子部分和所述猝滅劑部分是熒光團。

6.權利要求4-5中任一項的方法，其中所述報道分子部分是熒光團，且所述猝滅劑部分是暗猝滅劑。

7.權利要求1-6中任一項的方法，其中所述檢測步驟進一步包括（i）在所述第一步驟期間檢測與由所述第一標記發射的信號相對應的第一信號，（ii）在所述第二步驟期間檢測第二信號，以及（iii）從所述第二信號中減去所述第一信號以鑒定由所述第二標記發射的可檢測信號。

8.權利要求1-7中任一項的方法，其中所述第一和第二步驟分別保持至少10秒。

9.權利要求1-8中任一項的方法，其中所述擴增反應在有DNA聚合酶混合物的情況下進行。

10.用于檢測單個樣品容器中的多種靶核酸的試劑盒，所述試劑盒在分開的容器、小瓶或區室中包括（i）包括第一標記的探針和第一引物的第一引物/探針組，以及（ii）包括第二標記的探針和第二引物的第二引物/探針組，其中所述第一引物于第一溫度與所述多種靶核酸中的靶核酸退火且所述第二引物于第二溫度與所述多種所述靶核酸中的另外的核酸退火，并且所述第一溫度高于所述第二溫度。

11.權利要求10的試劑盒，其進一步包括用于擴增靶核酸所必需的試劑。

12.權利要求10-11中任一項的試劑盒，其中所述第一和第二標記的探針各自用相同的報道分子部分標記。

13.權利要求12的試劑盒，其中所述報道分子部分是熒光的。

14.權利要求10-13中任一項的試劑盒，其中所述第一和第二標記的探針各自用報道分子部分和猝滅劑部分標記。

15.權利要求14的試劑盒，其中所述報道分子部分和所述猝滅劑部分是熒光團。

16.權利要求14-15中任一項的試劑盒，其中所述報道分子部分是熒光團，且所述猝滅劑部分是暗猝滅劑。

17.權利要求10-16中任一項的試劑盒，其進一步包括已知濃度的對照核酸。