[發明專利]用于核酸測定的新型熒光淬滅探針

在審

• 申請號: 201880033206.0
• 申請日: 2018-05-17
• 公開（公告）號: CN110637095A
• 公開（公告）日: 2019-12-31
• 發明（設計）人: 蔵田信也;高田克巳
• 申請（專利權）人: 日鐵環境株式會社
• 主分類號: C12Q1/6876
• 分類號: C12Q1/6876;C12N15/09
• 代理公司: 11021 中科專利商標代理有限責任公司
• 代理人: 張國梁

提供一種熒光標記成本更低廉的QProbe。經熒光染料標記的核酸探針與靶核酸雜交時，使上述熒光染料的發光減少。在該探針中，其5′末端部位通過下述ssH氨基接頭被熒光染料標記，或其3′末端部位通過下述CA氨基接頭被熒光染料標記。該探針的堿基序列被設計為使得當該核酸探針與靶核酸雜交時，在該末端部中，在該探針與靶核酸雜交的末端堿基相距1至3個堿基的靶核酸的堿基序列中至少存在一個堿基以上的G(鳥嘌呤)。ssH氨基接頭CA氨基接頭。

技術領域

本發明涉及一種使用利用熒光染料標記的核酸探針，通過在均一溶液系統中由上述核酸探針與靶基因的雜交引起的熒光特性變化，而對靶基因進行定性、定量分析的基因分析技術。

背景技術

使用了在均一溶液系統中通過與靶核酸的雜交而熒光特性(熒光強度、熒光光譜等)發生變化的核酸探針(以下稱為均一溶液系統探針)的基因分析方法被廣泛普及。作為上述均一溶液系統探針，TaqMan探針(非專利文獻1)、分子信標(Molecular beacons，非專利文獻2)、QProbe(非專利文獻3)等被廣泛使用。其中，QProbe是基于由熒光染料和鳥嘌呤堿基之間的電子轉移引起的熒光淬滅現象(非專利文獻4)的均一溶液系統探針，通過與靶核酸雜交而熒光淬滅。通過監測該熒光淬滅，可以實現檢測靶核酸。此外，由于QProbe通過與靶核酸中的鳥嘌呤相互作用來淬滅熒光，因此與探針標記的色素僅為一種，與其他探針相比具有非常簡單的結構。因此，QProbe具有制造成本低廉的優點。

現有技術文獻

非專利文獻

非專利文獻1：Detection of specific polymerase chain reaction productby utilizing the 5′----3′exonuclease activity of Thermus aquaticus DNApolymerase.，Holland PM，Abramson RD，Watson R，Gelfand DH.，Proc Natl Acad Sci US A.，1991 Aug 15；88(16)：7276-80.

非專利文獻2：Molecular beacons：probes that fluoresce uponhybridization.，Tyagi S，Kramer FR.，Nat Biotechnol.，1996 Mar；14(3)：303-8.

非專利文獻3：Fluorescent quenching-based quantitative detection ofspecific DNA/RNA using a BODIPY((R))FL-labeled probe or primer.，Kurata S，Kanagawa T，Yamada K，Torimura M，Yokomaku T，Kamagata Y，Kurane R.，Nucleic AcidsRes.，2001 Mar 15；29(6)：E34.

非專利文獻4：Fluorescence-quenching phenomenon by photoinducedelectron transfer between a fluorescent dye and a nucleotide base.，TorimuraM，Kurata S，Yamada K，Yokomaku T，Kamagata Y，Kanagawa T，Kurane R.，Anal Sci.，2001Jan；17(1)：155-60.

發明內容

發明要解決的問題