[發(fā)明專利]用于視網(wǎng)膜疾病的核糖開關(guān)調(diào)節(jié)的基因治療

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201880030766.0
• 申請(qǐng)日: 2018-03-09
• 公開（公告）號(hào): CN110650624A
• 公開（公告）日: 2020-01-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: D·M·立平斯基;C·A·里德
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 威斯康星州醫(yī)藥大學(xué)股份有限公司
• 主分類號(hào): A01H1/00
• 分類號(hào): A01H1/00;A61K48/00;A01N25/00;C12N15/63;C12N15/113
• 代理公司: 31100 上海專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司
• 代理人: 葛臻翼;張佳鑫

1.通過調(diào)控轉(zhuǎn)基因的mRNA來調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)基因表達(dá)的外源核酸構(gòu)建體，該核酸編碼：

(a)目標(biāo)靶基因，

(b)至少一個(gè)位于轉(zhuǎn)基因非翻譯區(qū)內(nèi)的smiRNA開關(guān)，其中至少一個(gè)smiRNA開關(guān)包含能夠與以下結(jié)合的適體結(jié)構(gòu)域：配體，和初miRNA，

(c)與初miRNA的至少一部分互補(bǔ)的至少一個(gè)miRNA靶序列，

其中至少一個(gè)smiRNA開關(guān)通過以下兩者調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)基因的表達(dá)：(1)調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)基因mRNA的切割，(b)調(diào)節(jié)初miRNA從smiRNA的切割，其中至少一部分切割的初miRNA與至少一個(gè)使轉(zhuǎn)基因表達(dá)沉默的miRNA靶基因結(jié)合。

2.如權(quán)利要求1所述的構(gòu)建體，其中在不存在配體的情況下，所述初miRNA被從轉(zhuǎn)錄物上切割下來，并與至少一個(gè)miRNA靶序列結(jié)合，

其中初mRNA的部分與至少一種miRNA靶序列的結(jié)合使轉(zhuǎn)基因沉默。

3.如權(quán)利要求1或2所述的構(gòu)建體，其中所述配體和所述適體結(jié)構(gòu)域的結(jié)合改變了smiRNA的構(gòu)象，其中構(gòu)象變化抑制了初miRNA從轉(zhuǎn)錄本上切割的能力，其中轉(zhuǎn)基因能夠被翻譯。

4.如前述任一個(gè)權(quán)利要求所述的構(gòu)建體，其中所述smiRNA開關(guān)由核酸序列SEQ ID NO：1編碼。

5.如前述任一個(gè)權(quán)利要求所述的構(gòu)建體，其中所述至少一個(gè)miRNA靶序列由核酸序列GAGAGAATCTTCTTTCTGTCTATAAAA(SEQ ID NO：10)編碼。

6.如前述任一個(gè)權(quán)利要求所述的構(gòu)建體，其中所述構(gòu)建體編碼三個(gè)miRNA靶序列，其中至少三個(gè)miRNA靶序列由SEQ ID NO：2編碼。

7.如前述任一個(gè)權(quán)利要求所述的構(gòu)建體，其中所述構(gòu)建體包含一個(gè)或多個(gè)選自SEQ IDNO：21-35和37-51的smiRNA開關(guān)。

8.如前述任一個(gè)權(quán)利要求所述的構(gòu)建體，其中所述smiRNA位于3'UTR內(nèi)，至少一個(gè)miRNA靶序列位于5'UTR。

9.如前述任一個(gè)權(quán)利要求所述的構(gòu)建體，其中所述構(gòu)建體包含至少兩個(gè)miRNA靶序列。

10.如前述任一個(gè)權(quán)利要求所述的構(gòu)建體，其中與(c)的初miRNA的至少一部分互補(bǔ)的至少一個(gè)miRNA靶序列是構(gòu)建體內(nèi)轉(zhuǎn)基因的一部分，至少一部分切割的初miRNA與其結(jié)合。

11.如前述任一個(gè)權(quán)利要求所述的構(gòu)建體，其中所述轉(zhuǎn)基因編碼VEGF抑制劑。

12.如權(quán)利要求11所述的構(gòu)建體，其中所述VEGF抑制劑是阿柏西普，并由SEQ ID NO：8編碼。

13.如權(quán)利要求11所述的構(gòu)建體，其中所述VEGF抑制劑是由SEQ ID NO：36編碼的sFLT1。

14.如前述任一個(gè)權(quán)利要求所述的構(gòu)建體，其中所述適體與能夠穿過血液視網(wǎng)膜屏障的配體結(jié)合。

15.如權(quán)利要求14所述的構(gòu)建體，其中所述配體選自四環(huán)素、茶堿、鳥嘌呤、半乳糖醇、孕酮、甘露醇、雌二醇、多巴胺、奎尼丁、尿素、地高辛、尿嘧啶、維拉帕米、硫脲、莫西沙星、胸腺嘧啶、左氧氟沙星、皮質(zhì)酮、乙酰唑胺、睪酮、多四環(huán)素及其組合。

16.如權(quán)利要求12或13所述的構(gòu)建體，其中所述配體選自四環(huán)素、茶堿、和鳥嘌呤。

17.如權(quán)利要求1所述的構(gòu)建體，其中所述轉(zhuǎn)基因包含參與前列腺素合成的基因。