[發(fā)明專利]雙分化或多分化類器官

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201880027801.3
• 申請日: 2018-04-25
• 公開（公告）號: CN110573609A
• 公開（公告）日: 2019-12-13
• 發(fā)明（設計）人: J.諾布里奇;J.A.巴格利
• 申請（專利權）人: IMBA-莫利庫爾生物技術研究所
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12N5/079
• 代理公司: 11105 北京市柳沈律師事務所
• 代理人: 張曉飛

1.產(chǎn)生具有至少兩種組織類型的雙分化或多分化組織的體外方法，其包括以下步驟：提供發(fā)育至感興趣的分化階段的第一組織；提供發(fā)育至與所述第一組織的感興趣的分化階段不同的感興趣的分化階段的第二組織；將所述第一和第二組織放置在足以通過生長融合的接近處；允許所述第一和第二組織生長并彼此融合；從而產(chǎn)生包含具有不同分化階段的所述第一和第二組織的雙分化或多分化組織；優(yōu)選地，其中所述第一和/或第二組織，特別是兩者，衍生自多能干細胞，特別是誘導多能干細胞的體外培養(yǎng)物。

2.權利要求1的方法，其包括與將所述第二組織發(fā)育至不同的感興趣的分化階段分開將所述第一組織發(fā)育至感興趣的分化階段。

3.權利要求1或2的方法，其中至少所述第一和/或第二組織包含神經(jīng)元組織，優(yōu)選地包含神經(jīng)祖細胞和神經(jīng)元。

4.權利要求3的方法，其中所述第一組織的分化階段包含腹側前腦祖組織或吻腹側(rostro-ventral)前腦組織。

5.權利要求3或4的方法，其中所述第二組織的分化階段包含背側前腦組織或沒有分化為腹側或背側前腦的神經(jīng)外胚層。

6.權利要求1至5中任一項的方法，其中所述將所述第一和第二組織放置在足以通過生長融合的接近處并且允許所述第一和第二組織生長并彼此融合的步驟在懸浮培養(yǎng)中進行。

7.權利要求1至6中任一項的方法，其中將所述雙分化或多分化組織分化以形成神經(jīng)板。

8.權利要求1至7中任一項的方法，其中將所述第一和第二組織培養(yǎng)至至少100μm，優(yōu)選地至少150μm，特別優(yōu)選地至少200μm的大小。

9.權利要求1至8中任一項的方法，其中所述第一和/或第二組織表達可檢測標志物，所述可檢測標志物是來自所述第一和第二組織的組的另一者不表達的。

10.通過權利要求1至9中任一項的方法可獲得的雙分化或多分化組織。

11.具有不同分化階段的至少兩種組織類型的雙分化或多分化組織，其中所述組織類型的至少一種包含腹側神經(jīng)元組織，并且至少另一種組織類型是基本上非腹側的，但含有來自所述腹側神經(jīng)元組織的遷移細胞，該遷移細胞占所述基本上非腹側組織的細胞的不超過5％，并且所述雙分化或多分化組織在其最長維度上具有100μm至10mm的大小。

12.權利要求11的雙分化或多分化組織，其中所述組織類型的至少一種表達所述雙分化或多分化組織的另一種組織類型不表達的可檢測標志物，優(yōu)選熒光標志物。

13.權利要求10至12中任一項的雙分化或多分化組織，其為球狀體的形式或組織切片的形式。

14.測試或篩選影響雙分化或多分化組織的分化的候選化合物的方法，其包括使權利要求1至9中任一項的方法中的細胞或組織與所述候選化合物接觸或者使權利要求10至13中任一項的組織與所述候選化合物接觸，并且在培養(yǎng)物中維持所述接觸的組織，并且與未接觸所述候選化合物的所述組織相比觀察到所述組織中的任何分化變化。

15.用于根據(jù)權利要求1至9中任一項提供組織培養(yǎng)物的試劑盒，其包含腹側分化誘導劑和背側分化誘導劑，優(yōu)選WNT抑制劑和/或SSH增強劑作為腹側分化誘導劑和優(yōu)選SSH抑制劑作為背側分化誘導劑。