[發明專利]用于在酵母中生產聚酮化合物的方法和細胞系

在審

• 申請號: 201880025692.1
• 申請日: 2018-02-19
• 公開（公告）號: CN110637088A
• 公開（公告）日: 2019-12-31
• 發明（設計）人: 肖哈姆·慕克吉;亞歷山大·詹姆斯·坎貝爾;扎卡里·道格拉斯·威爾特希爾;凱文·約翰·陳
• 申請（專利權）人: 海牙森生物公司
• 主分類號: C12N15/52
• 分類號: C12N15/52;C12N1/19;C12N15/81;C12N9/00;C12P7/02;C12P7/20
• 代理公司: 11018 北京德琦知識產權代理有限公司
• 代理人: 潘懷仁;王珍仙

1.一種生產聚酮化合物的方法，所述方法包括：

提供酵母細胞，所述酵母細胞包括編碼聚酮化合物合成酶的第一多核苷酸，其中：

所述聚酮化合物合成酶用于由丙二?；o酶A生產至少一個種類的聚酮化合物，所述聚酮化合物具有結構I：

其中，在結構I上，R1是戊基，R2是H、羧基或甲基，并且R3是H、羧基或甲基；和

使所述酵母細胞繁殖，用于提供酵母細胞培養物。

2.根據權利要求1所述的方法，其中所述聚酮化合物合成酶包括來自盤基網柄菌的DiPKS聚酮化合物合成酶。

3.根據權利要求2所述的方法，其中所述第一多核苷酸包括用于DiPKS聚酮化合物合成酶的編碼序列，所述DiPKS聚酮化合物合成酶的一級結構與由SEQ ID NO:13的堿基535至9978限定的閱讀框編碼的蛋白質具有80％和100％之間的氨基酸殘基序列同源性。

4.根據權利要求3所述的方法，其中所述第一多核苷酸與SEQ ID NO:13的堿基535至9978具有80％和100％之間的堿基序列同源性。

5.根據權利要求2至4中任一項所述的方法，其中所述至少一個種類的聚酮化合物包括在R2處具有甲基的聚酮化合物。

6.根據權利要求2所述的方法，其中：

所述DiPKS聚酮化合物合成酶包括影響C-Met結構域的活性位點的突變，用于減輕所述至少一個種類的聚酮化合物的甲基化，使得所述至少一個種類的聚酮化合物包括其中R2是甲基并且R3是H的第一聚酮化合物，和其中R2是H并且R3是H的第二聚酮化合物。

7.根據權利要求6所述的方法，其中所述DiPKS聚酮化合物合成酶包括DiPKS^{G1516D；G1518A}聚酮化合物合成酶。

8.根據權利要求7所述的方法，其中所述第一多核苷酸包括用于所述DiPKS^G1516D；^G1518A聚酮化合物合成酶的編碼序列，所述DiPKS^{G1516D；G1518A}聚酮化合物合成酶的一級結構與由SEQ ID NO:9的堿基523至9966限定的閱讀框編碼的蛋白質具有80％和100％之間的氨基酸殘基序列同源性。

9.根據權利要求8所述的方法，其中所述第一多核苷酸與SEQ ID NO:9的堿基523至9966具有80％和100％之間的堿基序列同源性。

10.根據權利要求6所述的方法，其中所述DiPKS聚酮化合物合成酶包括DiPKS^G1516R聚酮化合物合成酶。

11.根據權利要求10所述的方法，其中所述第一多核苷酸包括用于所述DiPKS^G1516R聚酮化合物合成酶的編碼序列，所述DiPKS^G1516R聚酮化合物合成酶的一級結構與由SEQ ID NO:10的堿基523至9966限定的閱讀框編碼的蛋白質具有80％和100％之間的氨基酸殘基序列同源性。

12.根據權利要求11所述的方法，其中所述第一多核苷酸與SEQ ID NO:10的堿基523至9966具有80％和100％之間的堿基序列同源性。

13.根據權利要求2所述的方法，其中所述DiPKS聚酮化合物合成酶包括降低在所述DiPKS聚酮化合物合成酶的C-Met結構域的活性位點處的活性的突變，用于防止所述至少一個種類的聚酮化合物的甲基化，使得所述至少一個種類的聚酮化合物具有氫R2基團和氫R3基團。