[發明專利]利用檢測信號的自擴增原理的準確、迅速、便利的單一步驟疾病診斷方法

有效

• 申請號: 201880025139.8
• 申請日: 2018-04-13
• 公開（公告）號: CN110573879B
• 公開（公告）日: 2023-05-16
• 發明（設計）人: 李志遠;權政赫
• 申請（專利權）人: 塞爾美迪有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/553;G01N33/536;G01N33/569;G01N33/52
• 代理公司: 北京派特恩知識產權代理有限公司 11270
• 代理人: 薛恒;王琳

本發明涉及使免疫診斷和金粒子形成同時連接來實現檢測信號的自擴增，從而準確、迅速、便利的疾病標記物的檢測方法及試劑盒，更具體地，涉及利用檢測信號自擴增的疾病特異性標記物的檢測方法及試劑盒，包括：步驟(a)，在向預診斷溶液(pre?assay?solution)投入樣品及還原劑來組成的診斷溶液(assay?solution)中，同時誘導通過抗原?抗體免疫反應及金離子的還原的金粒子形成反應，在上述預診斷溶液中同時存在用于檢測疾病特異性標記物的抗體或抗原、游離金離子及吸附金離子，上述樣品含有與上述抗體或抗原特異性結合的疾病特異性抗原或抗體；以及步驟(b)，通過借助形成金粒子的發色反應確認是否具有疾病特異性標記物。本發明的方法可不經過如現有的酶聯免疫吸附測定法(ELISA)的診斷中通常所伴隨的固定化及清洗(washing)作業等的過程，可僅通過單一步驟診斷疾病，耗時幾個小時或長達幾天的診斷時間也縮短至10分鐘左右，尤其，可有效地利用于如需要急救的患者的疾病診斷，而且，無需額外的分析儀器也可通過肉眼確認檢查結果，并可使檢測費用最小化，因此，非常有用。

技術領域

本發明涉及使免疫診斷和金粒子形成同時連接來實現檢測信號的自擴增，從而準確、迅速、便利的疾病標記物的檢測方法及試劑盒，更具體地，涉及利用檢測信號自擴增的疾病特異性標記物的檢測方法及試劑盒，包括：步驟(a)，在向預診斷溶液(pre-assaysolution)投入樣品及還原劑來組成的診斷溶液(assay?solution)中，同時誘導通過抗原-抗體免疫反應及金離子的還原的金粒子形成反應，在上述預診斷溶液中同時存在用于檢測疾病特異性標記物的抗體或抗原、游離金離子及吸附金離子，上述樣品含有與上述抗體或抗原特異性結合的疾病特異性抗原或抗體；以及步驟(b)，通過借助形成金粒子的發色反應確認是否具有疾病特異性標記物。

背景技術

在現代疾病診斷方法中，最理想的方法為快速、準確且步驟簡單的診斷方法。并且，這種快速診斷對于如急性心肌梗塞的需要急救的患者更加重要。在需要急救的患者的情況下，根據這種快速、準確診斷的適當治療與生存率之間關聯，因此，相比于無需急救的患者，更加重要。

在臨床檢查領域中，利用生物試樣(血液、尿等)診斷各種疾病，作為這種診斷方法，研發并利用各種測定法。作為這種測定方法的代表性方法，可例舉利用酶反應的生物化學測定法或利用抗原-抗體反應的免疫測定法。最近，需要精準地測定生物試樣中的成分，廣泛使用利用高特異性抗原-抗體反應的免疫測定方法。

免疫測定方法為利用抗原-抗體的結合能力的方法。免疫分析法主要用于分析樣品內特定抗原(或抗體)-特異性抗體(或抗原)的存在。這使樣品向在固體載體固定化的特定抗原(或抗體)流動(wash)，之后，利用各種方法使結合的抗體(或抗原)視覺化。

通常，在免疫測定方法中，為了指定(assign)與未知樣品有關的濃度，需要利用校準器(calibrator)。在靜電免疫分析法中，使用校準器組，繪制(plotted)信號比濃度的校準曲線(calibration?curve)，并通過內插法(interpolation)確定未知樣品的濃度(Ibrahim?A.Darwish，International?Journal?of?Biomedical?Science，Vol.2pp.217-235，2006)。

作為免疫測定法，根據其檢測原理及方法可分為使用放射性同位素檢測信號的放射免疫分析法(RIA：radioimmunoassay)、使用通過酶擴增信號的酶免疫測定法(ELISA：enzyme-linked?immunosorbent?assay，或EIA：enzyme?immunoassay)、利用熒光檢測的熒光抗體法(FA：fluorescence?antibody?technique)、使用化學發光的化學發光免疫測定法(CLIA：chemiluminescence?immunoassay)等，此外，還可根據標記物質的使用方法或底物的種類分類。