[發明專利]產生T細胞祖細胞的方法

在審

• 申請號: 201880024963.1
• 申請日: 2018-02-12
• 公開（公告）號: CN110506110A
• 公開（公告）日: 2019-11-26
• 發明（設計）人: I·安德列;M·卡瓦薩納;馬葵英;J·陳
• 申請（專利權）人: 巴黎公共救濟院;理想基金會-遺傳疾病研究所;巴黎笛卡爾大學;法國國家健康和醫學研究院
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783;A61K35/17
• 代理公司: 72003 隆天知識產權代理有限公司
• 代理人: 吳小瑛;付文川<國際申請>=PCT/EP

1.一種產生T細胞前體的體外方法，其包括步驟：在固定的Notch配體存在下，在含有TNF-α的培養基中培養CD34+細胞。

2.一種產生T細胞前體的體外方法，其包括步驟：在固定的Notch配體存在下，在含有芳烴/二噁英受體拮抗劑特別是StemRegenin 1(SR1)的培養基中，培養CD34+細胞。

3.根據權利要求1或2所述的體外方法，其中培養基含有TNF-α和芳烴/二噁英受體拮抗劑二者。

4.根據權利要求1至3任一項所述的體外方法，其中從培養的第0天開始，在培養基中存在TNF-α和/或芳烴/二噁英受體拮抗劑。

5.根據權利要求1至4任一項所述的體外方法，其中CD34+細胞已從成年供體中分離。

6.根據權利要求1至5任一項所述的體外方法，其中所述細胞在TNF-α和/或SR1存在下培養至多10天。

7.根據權利要求1至6任一項所述的體外方法，其中所述細胞在TNF-α和/或芳烴/二噁英受體拮抗劑存在下培養3至7天。

8.根據權利要求1至7任一項所述的體外方法，其中將TNF-α和/或芳烴/二噁英受體拮抗劑以大于或等于3ng/ml的濃度加入培養基中。

9.根據權利要求1至8任一項所述的體外方法，其中所述Notch配體是與IgG蛋白且優選IgG2蛋白的Fc區融合的δ樣-4配體的可溶性結構域。

10.根據權利要求1至9任一項所述的體外方法，其中所述細胞也暴露于纖連蛋白片段，其中所述片段包含RGDS和CS-1模式以及肝素結合結構域，所述纖連蛋白片段優選固定在培養容器內表面上。

11.根據權利要求10所述的體外方法，其中纖連蛋白片段是

12.根據權利要求1至11任一項所述的體外方法，其中在CD34+細胞暴露于Notch配體的至少一些時間內，所述培養基還含有用于轉染或轉導CD34+細胞的載體。

13.根據權利要求1至12任一項所述的體外方法，其中所述培養基含有選自白介素7(IL-7)、SCF(干細胞因子)、血小板生成素(TPO)和Flt3配體(FLT3L)的至少三種，優選全部四種的細胞因子或生長因子。

14.一種獲得T細胞祖細胞的方法，其包括步驟：

a.進行權利要求1至13任一項所述的方法，和

b.純化產生的T細胞祖細胞，

c.任選地在用于向患者注射的小袋中條件化T細胞祖細胞。

15.一種CD7+T細胞祖細胞群，其中該群中CD34-和CD1a-的細胞比例高于50％。

16.一種靜脈注射用小袋，其含有權利要求15所述的T細胞祖細胞群。

17.一種獲得轉化的T細胞祖細胞的體外方法，其包括步驟：

a.在固定的Notch配體存在下，在含有TNF-α的培養基中培養CD34+細胞，

b.將細胞暴露于用于轉染或轉導CD34+細胞的載體。

18.一種獲得修飾的T細胞祖細胞的體外方法，其包括步驟：

a.在固定的Notch配體存在下，在含有TNF-α的培養基中培養CD34+細胞，

b.將細胞暴露于含有適于基因編輯的元件的載體或核酸序列。