[發明專利]蜂王漿主蛋白的抗體及其用途

有效

• 申請號: 201880024922.2
• 申請日: 2018-04-11
• 公開（公告）號: CN110573526B
• 公開（公告）日: 2022-03-01
• 發明（設計）人: 楊柏宏;王俊凱;溫國光
• 申請（專利權）人: 威爾科學公司
• 主分類號: C07K16/26
• 分類號: C07K16/26;C07K14/435;A23L21/20;A61K35/644;C07K16/18;A23L33/17
• 代理公司: 北京英賽嘉華知識產權代理有限責任公司 11204
• 代理人: 王達佐;洪欣

特異性針對蜂王漿主蛋白的抗體可被用于純化包括天然蜂王漿主蛋白的蜂王漿主蛋白的方法中。這些方法可產生富集天然蜂王漿主蛋白的組合物。純化的蜂王漿主蛋白可被用于產生包含天然蜂王漿主蛋白的美容產品。特異性針對蜂王漿主蛋白的抗體可被用于純化包括天然蜂王漿主蛋白的蜂王漿主蛋白的方法中。這些方法可產生富集天然蜂王漿主蛋白的組合物。純化的蜂王漿主蛋白可被用于產生包含天然蜂王漿主蛋白的美容產品。分離的核酸編碼與蜂王漿主蛋白特異性結合的單克隆抗體。

通過引用并入任何優先權申請

在此根據37 CFR 1.57，通過引用將與本申請一起提交的在申請數據表中確定的外國或本國優先權要求的任何和所有申請并入本文中。本申請要求2017年4月13日提交的第62/485,263號美國臨時申請的權益，其在此通過引用整體并入本文中。

序列表、表格或計算機程序列表的引用

本申請與電子格式的序列表一起提交。序列表以標題為WYLS001WO.TXT的文件提供，該文件于2018年4月5日創建和最后修改，大小為14,267字節。電子格式的序列表中的信息通過引用整體并入本文中。

發明領域

本文中的一些實施方案總體上涉及特異性針對蜂王漿主蛋白(royalactin,RA)的抗體，以及使用此類抗體例如純化天然蜂王漿主蛋白的方法。

發明概述

一些方面包括純化天然蜂王漿主蛋白的方法。所述方法可包括使包含天然蜂王漿主蛋白的生物物質溶解在例如水性溶液中。所述方法可包括使包含溶解的生物物質的溶液(如上所述的，例如其可以為水性溶液)與被固定在基質上的單克隆抗體接觸，其中所述單克隆抗體與SEQ ID NO:2的氨基酸序列特異性結合，并且其中所述單克隆抗體與所述天然蜂王漿主蛋白結合。所述方法可包括從所述溶液中分離與天然蜂王漿主蛋白結合的單克隆抗體，例如經由洗滌。所述方法還可包括從所述單克隆抗體去除結合的天然蜂王漿主蛋白，例如通過洗脫，從而純化天然蜂王漿主蛋白。在一些實施方案中，所述方法還包括制備包含純化的天然蜂王漿主蛋白的組合物。所述組合物可包含凍干的天然蜂王漿主蛋白，或者可以為包含天然蜂王漿主蛋白的美容產品(例如外用美容產品)的一部分。因此，在一些實施方案中，所述方法產生富集天然蜂王漿主蛋白的組合物。所述組合物可包含至少1％(w/w)的天然蜂王漿主蛋白，例如，至少1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％13％、14％、15％、16,％、17％、18％、19％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、70％、80％或90％的天然蜂王漿主蛋白，包括所列值中任意兩個之間的范圍，例如1％-90％、1％-50％、1％-30％、1％-20％、1％-10％、5％-90％、5％-50％、5％-30％、5％-20％、5％-10％、10％-90％、10％-50％、10％-30％、10％-20％、20％-90％、20％-50％或20％-30％。在一些實施方案中，所述抗體包含小鼠抗體。在一些實施方案中，如本文中所述的用于純化天然蜂王漿主蛋白的任何方法的抗體包含重鏈可變區(HCVR)和輕鏈可變區(LCVR)，所述重鏈可變區(HCVR)包含：SEQ NO:6的CDR3結構域的CDR3結構域；SEQ NO:6的CDR2結構域的CDR2結構域和SEQ NO:6的CDR1結構域的CDR1結構域，所述輕鏈可變區(LCVR)包含：SEQ NO:8的CDR3結構域的CDR3結構域；SEQ NO:8的CDR2結構域的CDR2結構域和SEQNO:8的CDR1結構域的CDR1結構域。在一些實施方案中，如本文中所述的用于純化天然蜂王漿主蛋白的任何方法的抗體包含SEQ ID NO:6的HCVR的HCVR和SEQ ID NO:8的LCVR的LCVR。在一些實施方案中，所述抗體包括抗體4G6C5、抗體8C5C9、抗體8C5D3、抗體4G6E2或抗體9G6A2，或者它們的結合片段。在一些實施方案中，抗體包含：(a)重鏈可變區(HCVR)和輕鏈可變區(LCVR)，所述重鏈可變區(HCVR)具有抗體4G6C5的CDR3結構域的CDR3結構域、抗體4G6C5的CDR2結構域的CDR2結構域和抗體4G6C5的CDR1結構域的CDR1結構域，所述輕鏈可變區(LCVR)具有抗體4G6C5的CDR3結構域的CDR3結構域、抗體4G6C5的CDR2結構域的CDR2結構域和抗體4G6C5的CDR1結構域的CDR1結構域；或(b)HCVR和LCVR，所述HCVR具有抗體8C5C9的CDR3結構域的CDR3結構域、抗體8C5C9的CDR2結構域的CDR2結構域和抗體8C5C9的CDR1結構域的CDR1結構域，所述LCVR具有抗體8C5C9的CDR3結構域的CDR3結構域、抗體8C5C9的CDR2結構域的CDR2結構域和抗體8C5C9的CDR1結構域的CDR1結構域；或(c)HCVR和LCVR，所述HCVR具有抗體8C5D3的CDR3結構域的CDR3結構域、抗體8C5D3的CDR2結構域的CDR2結構域和抗體8C5D3的CDR1結構域的CDR1結構域，所述LCVR具有抗體8C5D3的CDR3結構域的CDR3結構域、抗體8C5D3的CDR2結構域的CDR2結構域和抗體8C5D3的CDR1結構域的CDR1結構域；或(d)HCVR和LCVR，所述HCVR具有抗體4G6E2的CDR3結構域的CDR3結構域、抗體4G6E2的CDR2結構域的CDR2結構域和抗體4G6E2的CDR1結構域的CDR1結構域，所述LCVR具有抗體4G6E2的CDR3結構域的CDR3結構域、抗體4G6E2的CDR2結構域的CDR2結構域和抗體4G6E2的CDR1結構域的CDR1結構域；或(e)HCVR和LCVR，所述HCVR具有抗體9G6A2的CDR3結構域的CDR3結構域、抗體9G6A2的CDR2結構域的CDR2結構域和抗體9G6A2的CDR1結構域的CDR1結構域，所述LCVR具有抗體9G6A2的CDR3結構域的CDR3結構域、抗體9G6A2的CDR2結構域的CDR2結構域和抗體9G6A2的CDR1結構域的CDR1結構域。在一些實施方案中，抗體與上文所列的抗體中的至少一種競爭結合蜂王漿主蛋白。在一些實施方案中，所述生物物質包含昆蟲的蜂王漿。在一些實施方案中，所述生物物質包含經基因工程化以產生天然蜂王漿主蛋白的細胞提取物。在一些實施方案中，所述昆蟲屬于蜂(Apis)屬。在一些實施方案中，所述基質包含瓊脂糖。在一些實施方案中，分離和去除包括免疫沉淀。在一些實施方案中，使用親和柱進行所述接觸、分離和去除。在一些實施方案中，包含純化的天然蜂王漿主蛋白(和富集的天然蜂王漿主蛋白)的組合物包含至少30％(w/w)的凍干的天然蜂王漿主蛋白。在一些實施方案中，包含所述天然蜂王漿主蛋白的外用美容產品包括外用洗劑、乳膏、糊劑、膠劑、噴霧劑、粉劑或眉筆。在一些實施方案中，外用美容產品包含至少10％的蜂王漿主蛋白(w/w)。在一些實施方案中，提供了包含如本文中所述的含有純化的天然蜂王漿主蛋白的組合物的試劑盒。由此，在一些實施方案中，試劑盒包含如本文中所述的富含天然蜂王漿主蛋白的組合物。