[發明專利]穩定的VAMP報告子檢測

在審

• 申請號: 201880024517.0
• 申請日: 2018-02-14
• 公開（公告）號: CN110506123A
• 公開（公告）日: 2019-11-26
• 發明（設計）人: 巴茲貝克·達夫列托夫;安德魯·亞歷山大·佩登;亞歷山大·米卡埃爾·魯道夫·魯斯特;席亞拉·路易絲·多蘭
• 申請（專利權）人: 謝菲爾德大學
• 主分類號: C12Q1/37
• 分類號: C12Q1/37;G01N33/573;C07K14/705;C12Q1/66
• 代理公司: 11332 北京品源專利代理有限公司
• 代理人: 劉明海;寧濤<國際申請>=PCT/GB2

1.一種多肽，其包含具有熒光素酶活性的N-末端多肽結構域和具有VAMP1、VAMP2或VAMP3活性的C-末端多肽結構域。

2.根據權利要求1所述的多肽，其中具有VAMP2活性的多肽結構域包含SEQ ID NO：8或SEQ ID NO：2的氨基酸序列，或其保守氨基酸序列變體。

3.根據權利要求1所述的多肽，其中具有VAMP1活性的多肽結構域包含SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：1的氨基酸序列，或其保守氨基酸序列變體。

4.根據權利要求1所述的多肽，其中具有VAMP3活性的多肽結構域包含SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：3的氨基酸序列，或其保守氨基酸序列變體。

5.根據任意前述權利要求所述的多肽，其中具有熒光素酶活性的多肽結構域包含SEQID NO：4的氨基酸序列，或其保守氨基酸序列變體。

6.一種核酸分子，其編碼根據權利要求1至5中任一項所述的多肽。

7.一種表達載體，其包含根據權利要求6所述的核酸分子。

8.一種遺傳修飾的細胞，其包含根據權利要求6所述的核酸分子或根據權利要求7所述的表達載體。

9.根據權利要求8所述的遺傳修飾的細胞，其中所述細胞選自由以下組成的組：SiMa神經母細胞瘤細胞、LAN5神經母細胞瘤細胞、NG108神經母細胞瘤細胞、永生化神經元和原代神經元。

10.根據前述權利要求中任一項所述的多肽、核酸分子、表達載體或基因修飾的細胞用于檢測神經毒素活性的用途，其中所述神經毒素活性選自由以下組成的組：破傷風神經毒素活性、B型肉毒桿菌神經毒素活性、D型肉毒桿菌神經毒素活性、F型肉毒桿菌神經毒素活性、G型肉毒桿菌神經毒素活性，或其任意組合。

11.根據權利要求10所述的用途，其中，在包含藥物產品、食物樣品、臨床樣品或環境樣品或其任意組合的測試樣品中檢測神經毒素活性。

12.根據權利要求10或11所述的用途，其中，在包含破傷風類毒素或肉毒桿菌類毒素或其組合的測試樣品中檢測神經毒素活性。

13.根據權利要求10或11所述的用途，其中，在包含破傷風神經毒素、B型肉毒桿菌神經毒素、D型肉毒桿菌神經毒素、F型肉毒桿菌神經毒素、G型肉毒桿菌神經毒素或其任意組合的測試樣品中檢測神經毒素活性。

14.一種檢測測試樣品中神經毒素活性的方法，所述方法包括：

(a)在以下條件下培養根據權利要求8或9所述的遺傳修飾的細胞，所述條件允許表達包含具有熒光素酶活性的N-末端多肽結構域和具有VAMP1、VAMP2或VAMP3活性的C-末端多肽的多肽；

(b)在以下條件下在測試樣品的存在下培養(a)的細胞，所述條件允許包含具有熒光素酶活性的N-末端多肽結構域和具有VAMP1、VAMP2或VAMP3活性的C-末端多肽的多肽的神經毒素誘導的裂解；和

(c)確定所述多肽的神經毒素誘導的裂解的水平，其中所述多肽的神經毒素誘導的裂解的檢測指示神經毒素活性；

其中所述神經毒素活性選自由以下組成的組：破傷風神經毒素活性、B型肉毒桿菌神經毒素活性、D型肉毒桿菌神經毒素活性、F型肉毒桿菌神經毒素活性和G型肉毒桿菌神經毒素活性，或其任意組合。

15.根據權利要求14所述的方法，其中，培養步驟(a)和(b)同時進行。

16.根據權利要求14或15所述的方法，其中，在培養基中提供所述測試樣品。