[發(fā)明專利]微小物質(zhì)封入方法及微小物質(zhì)檢測(cè)方法以及微小物質(zhì)檢測(cè)用裝置

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201880021677.X
• 申請(qǐng)日: 2018-03-28
• 公開（公告）號(hào): CN110462365B
• 公開（公告）日: 2022-03-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 野地博行;田端和仁
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 國立研究開發(fā)法人科學(xué)技術(shù)振興機(jī)構(gòu)
• 主分類號(hào): G01N1/04
• 分類號(hào): G01N1/04;G01N1/00
• 代理公司: 中科專利商標(biāo)代理有限責(zé)任公司 11021
• 代理人: 宋明;張瑩

本發(fā)明提供，作為利用簡易操作，將核酸、蛋白質(zhì)、病毒及細(xì)胞等檢測(cè)對(duì)象物質(zhì)封入極小容積的液滴中，能夠進(jìn)行高靈敏度檢測(cè)的技術(shù)，在基板表面互相分開形成的多個(gè)凹部的至少一部分中封入微小物質(zhì)的方法，其至少包括以下步驟：(1)第一步驟，在上述基板的凹部形成面的上方配置插入體，該插入體與上述基板的相對(duì)位置根據(jù)設(shè)置于上述插入體的支持部進(jìn)行定位，將上述插入體的下表面與上述基板的上述凹部形成面對(duì)向配置，由此在上述插入體的下表面與上述基板的上述凹部形成面之間設(shè)置溶液導(dǎo)入空間，并且設(shè)置與上述溶液導(dǎo)入空間連通的溶液排出空間，使所述溶液排出空間位于上述插入體的上述下表面的上方，且在上述基板與上述插入體之間、上述基板內(nèi)和/或上述插入體內(nèi)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及微小物質(zhì)封入方法及微小物質(zhì)檢測(cè)方法以及微小物質(zhì)檢測(cè)用裝置。更具體而言，涉及在基板上互相分開形成的多個(gè)凹部內(nèi)形成封入微小物質(zhì)的液滴的方法等。

背景技術(shù)

為了進(jìn)行疾病、傳染病等的診斷，因此，要求用于迅速、簡便，且高靈敏度地檢測(cè)核酸、蛋白質(zhì)、病毒及細(xì)胞等的標(biāo)記的技術(shù)。例如，從在體積1mm³的腫瘤中包含的100萬個(gè)癌癥細(xì)胞將標(biāo)記蛋白(從各細(xì)胞各100分子)分泌到5L的血中的情況下，標(biāo)記蛋白的血中濃度為30aM左右。要求對(duì)這樣的濃度非常低的物質(zhì)也能夠檢測(cè)的技術(shù)。

作為這樣的技術(shù)，存在“單分子酶測(cè)定”：其將核酸、蛋白質(zhì)、病毒及細(xì)胞等檢測(cè)對(duì)象物質(zhì)封入極小容積的液滴中，通過使用了標(biāo)記抗體的免疫學(xué)手段進(jìn)行檢測(cè)。利用單分子酶測(cè)定，能夠?qū)z測(cè)對(duì)象物質(zhì)以一分子單位的靈敏度進(jìn)行檢測(cè)。

在專利文獻(xiàn)1中，作為能夠應(yīng)用于單分子酶測(cè)定的技術(shù)，公開了“一種顆粒封入方法，其特征在于包括：顆粒導(dǎo)入步驟，其是向下層部與上層部之間的空間導(dǎo)入包含顆粒的親水性溶劑，該下層部中形成有多個(gè)僅可以收容1個(gè)所述顆粒的收容部，多個(gè)所述收容部被具有疏水性的上表面的側(cè)壁互相隔開，該上層部與該下層部的形成有所述收容部的面相對(duì)向；疏水性溶劑導(dǎo)入步驟，其在所述顆粒導(dǎo)入步驟之后向所述空間導(dǎo)入疏水性溶劑”。

專利文獻(xiàn)1所公開的技術(shù)，使用了“一種陣列，其特征在于：其具備下層部及上層部，所述下層部中形成有多個(gè)收容部，該多個(gè)收容部被具有疏水性的上表面的側(cè)壁互相隔開，所述上層部與所述下層部的形成有所述收容部的面以隔著空間的方式而相對(duì)向”，其使用的是具有下層部和上層部隔著空間相對(duì)的流通池結(jié)構(gòu)的陣列。根據(jù)該技術(shù)，認(rèn)為“可以將大量顆粒高效地封入陣列中，因此能夠以高靈敏度檢測(cè)出低濃度的靶分子”。

現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)

專利文獻(xiàn)

專利文獻(xiàn)1：國際公開2012/121310號(hào)

專利文獻(xiàn)2：日本特開2004-309405號(hào)

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明所要解決的問題

本發(fā)明的主要目的在于提供用于利用簡易操作，將核酸、蛋白質(zhì)、病毒及細(xì)胞等檢測(cè)對(duì)象物質(zhì)封入極小容積的液滴中，能夠進(jìn)行高靈敏度的檢測(cè)的技術(shù)。

解決問題的方法

為了解決上述課題，本發(fā)明提供以下[1]～[32]。

[1]在基板的表面互相分開形成的多個(gè)凹部的至少一部分中封入微小物質(zhì)的方法，其包括：

(1)第一步驟，在上述基板的凹部形成面的上方配置插入體，該插入體與上述基板的相對(duì)位置根據(jù)設(shè)置于上述插入體的支持部進(jìn)行定位，將上述插入體的下表面與上述基板的上述凹部形成面對(duì)向配置，由此在上述插入體的下表面與上述基板的上述凹部形成面之間設(shè)置溶液導(dǎo)入空間，且，

設(shè)置與上述溶液導(dǎo)入空間連通的溶液排出空間，使所述溶液排出空間位于上述插入體的上述下表面的上方，且在上述基板與上述插入體之間、上述基板內(nèi)和/或上述插入體內(nèi)；以及

(2)第二步驟，將包含上述微小物質(zhì)和第一溶劑的第一溶液導(dǎo)入上述溶液導(dǎo)入空間內(nèi)，以及