[發明專利]用于提取和擴增核酸的試劑

有效

• 申請號: 201880017752.5
• 申請日: 2018-03-07
• 公開（公告）號: CN110431232B
• 公開（公告）日: 2023-10-24
• 發明（設計）人: 佐藤寬
• 申請（專利權）人: 東曹株式會社
• 主分類號: C12N15/09
• 分類號: C12N15/09;C12Q1/6806
• 代理公司: 北京林達劉知識產權代理事務所(普通合伙) 11277
• 代理人: 劉新宇;李茂家

本發明解決的問題在于提供用于提取/擴增核酸提取對象的核酸的試劑，所述試劑的特征在于簡單、快速且高效地從核酸提取對象中提取核酸并且最小化核酸擴增反應的抑制，以及解決的問題在于提供使用所述試劑提取和擴增核酸的方法。通過使用用于從含有核酸提取對象的樣品中提取和擴增核酸提取對象的核酸的試劑盒來解決所述問題，所述試劑盒包括(i)至少含有具有甾體類骨架的表面活性劑的核酸提取試劑，(ii)具有碳數為1?4的羥烷基的γ?環糊精，和(iii)核酸擴增試劑。

技術領域

本發明涉及用于簡單、快速且高效地提取和擴增核酸的試劑，以及使用該試劑提取和擴增核酸的方法。

背景技術

在傳染病的臨床檢查領域，簡單、快速且高靈敏度地檢測病原體是非常重要的，并且快速檢測試劑盒已廣泛普及。使用核酸擴增技術的檢測方法已知是用于高靈敏度檢測病原體的方法。當通過使用核酸擴增技術的這類檢測方法檢測病原體時，通常預先進行從含有病原體的樣品中提取核酸的操作。在這樣的情況下采用的方法已知涉及使用表面活性劑從病原體提取核酸、使用環糊精中和表面活性劑對核酸擴增反應的抑制作用、以及使核酸進行擴增核酸的步驟。

在專利文獻1中，將通過用官能團修飾來制備的α、β、γ-環糊精列為用于核酸擴增反應的試劑的組分，并且例示碳數為1-4的羥烷基等作為官能團。專利文獻1進一步描述了在文中添加的2-羥丙基-β-環糊精和例如脫氧膽酸鈉等表面活性劑共存的情況下進行PCR，然后通過添加環糊精改善DNA聚合酶對抑制作用的抗性。然而，專利文獻1并沒有具體記載作為環糊精的具有碳數為1-4的羥烷基的γ-環糊精。

現有技術文獻

專利文獻

專利文獻1：日本特開2014-198029號公報

發明內容

發明要解決的問題

本發明的目的是提供用于提取和擴增核酸的試劑，因此從例如微生物等核酸提取對象中簡單、快速且高效地提取核酸，并且最小化核酸擴增反應的抑制。

用于解決問題的方案

作為實現上述目的的深入研究的結果，本發明人完成了本發明。具體地，本發明包括以下實施方案。

<1>一種用于從含有核酸提取對象的樣品提取和擴增核酸提取對象的核酸的試劑盒，其包括以下(i)、(ii)和(iii)，其中核酸提取對象選自微生物、動物細胞、植物細胞、和細胞外小泡(extracellular vesicle)：

(i)至少含有具有甾體類(steroid)骨架的表面活性劑的核酸提取試劑；

(ii)具有碳數為1-4的羥烷基的γ-環糊精；和

(iii)核酸擴增試劑。

<2>根據<1>所述的試劑盒，其中具有碳數為1-4的羥烷基的γ-環糊精為2-羥丙基-γ-環糊精。

<3>根據<1>或<2>所述的試劑盒，其中具有碳數為1-4的羥烷基的γ-環糊精包含在核酸擴增試劑中。

<4>根據<1>至<3>任一項所述的試劑盒，其中具有碳數為1-4的羥烷基的γ-環糊精的濃度是具有甾體類骨架的表面活性劑的濃度的4倍以上。

<5>根據<1>至<4>任一項所述的試劑盒，其中核酸提取對象為微生物。

<6>一種用于從含有核酸提取對象的樣品中提取和擴增核酸提取對象的核酸的方法，其包括以下步驟(i)、(ii)和(iii)，其中核酸提取對象選自微生物、動物細胞、植物細胞、和細胞外小泡：