[發明專利]包含寡肽的培養基

在審

• 申請號: 201880017286.0
• 申請日: 2018-03-02
• 公開（公告）號: CN110418837A
• 公開（公告）日: 2019-11-05
• 發明（設計）人: G·納奧普;F·梅茨;C·凱斯勒
• 申請（專利權）人: 贏創德固賽有限公司
• 主分類號: C12N5/00
• 分類號: C12N5/00
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所 11038
• 代理人: 張小勇

本發明涉及培養基，優選細胞培養基，其包含至少一種長度為2?10個氨基酸的寡肽，所述氨基酸為天然氨基酸，并且所述氨基酸中的至少一個為賴氨酸(Lys)并且另外一個氨基酸選自半胱氨酸(Cys)、胱氨酸(Cyss)、亮氨酸(Leu)、酪氨酸(Tyr)、纈氨酸(Val)和異亮氨酸(Ile)，并且所述寡肽以至少0.1mM的量存在。本發明還涉及本發明所述的培養基用于培養細胞、優選植物細胞、動物細胞或哺乳動物細胞的用途。本發明的另一方面涉及制備細胞培養產物的方法，包括以下步驟：(i)提供能夠產生所述細胞培養產物的細胞；(ii)使所述細胞與根據本發明所述的培養基接觸；和(iii)從所述培養基或所述細胞中獲得所述細胞培養產物。

發明領域

本發明涉及生物技術生產方法。更具體地，本發明涉及用于生物技術生產方法的改進的培養基、使用這種改進的培養基的方法以及使用改進的培養基從該方法獲得的產物。

發明背景

生物技術方法廣泛用于生物產物的生產。這些方法通常涉及在培養細胞生長和產物形成所允許的條件下在培養基中培養細胞。在生物技術生產中有用的細胞是細菌細胞、真菌細胞、酵母細胞和動物或植物來源的細胞。

長期以來，動物細胞培養物已被用于生產生物產物，例如治療性蛋白質、多肽、寡肽或其他生物分子，例如治療性多糖。在這種細胞培養方法中，通常經遺傳修飾以產生所需產物的動物細胞在液體、固體或半固體培養基中培養用于細胞增殖和產物形成。細胞培養的一個顯著優點是這樣的事實：動物細胞和植物細胞能夠進行初級產物的翻譯后修飾，例如多肽的折疊和翻譯后修飾。

在生物技術生產過程中、特別是在動物細胞培養中，細胞培養條件的控制和優化對于細胞增殖和產物形成是至關重要的。一個決定性因素是培養基組成。最終細胞培養產物的濃度和質量在很大程度上取決于培養基組成。動物和植物細胞培養在所需的營養組成和培養條件方面是特別苛刻的。所需的營養物質不僅包括基本的碳源、氮源和能源(如糖和氨)，而且包括更復雜的營養物質(如必需氨基酸、生長因子和維生素)。為此，已經使用具有復雜營養組成(例如血清)的動物細胞培養基的補充來為動物細胞提供多種營養物質。然而，監管和安全問題以及可用的血清來源的異質性問題導致該行業努力從工業細胞培養工藝中消除血清和其他非成分確定的培養基。然而，在無血清培養基中生長的細胞培養物通常顯示出營養不良。為此，已經進行了很多努力來鑒定復雜培養基的那些營養成分，以及它們的最佳濃度，這是細胞培養物中令人滿意的生長和蛋白質形成所需的。

已知用氨基酸供應細胞培養物對生長速率和產量具有顯著影響。谷氨酰胺常規用于細胞培養基，因為它是培養細胞的重要的碳源、氮源和能源。已經證明，動物細胞培養物的最佳生長所需的谷氨酰胺的量是其他氨基酸量的3至10倍(Eagle等人，Science 130：432-37)。然而，谷氨酰胺作為營養物質在高溫(例如加熱滅菌條件)下溶解于水時是不穩定的，因為在加熱時形成了焦熱谷氨酸和氨(Roth等人，1988，In Vitro Cellular&Developmental Biology 24(7)：696-98)。為此，谷氨酸而不是谷氨酰胺通常用于細胞培養基(Cell Culture Technology for Pharmaceutical and Cell-based Therapies，52，Sadettin等人，Eds.，Taylor and Francis Group，2006)。其他研究小組試圖通過向細胞培養基中加入含谷氨酰胺的二肽(如丙氨酰谷氨酰胺或甘氨酰谷氨酰胺)來避免形成不需要的物質，如焦谷氨酸和氨(Roth等人(1988)，In Vitro Cellular&Developmental Biology24(7)：696-98)。然而其他研究小組已提出?；囊允蛊湓诩訜釡缇鷹l件下更穩定。US5,534,538描述了N-?；募捌湓诩訜釡缇哪c內或腸胃外營養產物以及細胞培養基中的用途。