[發(fā)明專利]過表達(dá)DNA聚合酶亞基的經(jīng)修飾的酵母細(xì)胞

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201880015623.2
• 申請日: 2018-01-16
• 公開（公告）號: CN110382520A
• 公開（公告）日: 2019-10-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: C·E·G·帕揚(yáng);M·齊
• 申請（專利權(quán)）人: 丹尼斯科美國公司
• 主分類號: C07K14/395
• 分類號: C07K14/395;C12P7/14;C12P7/16
• 代理公司: 北京市中咨律師事務(wù)所 11247
• 代理人: 史文靜;黃革生

1.一種衍生自親本酵母細(xì)胞的經(jīng)修飾的酵母細(xì)胞，所述經(jīng)修飾的細(xì)胞包含遺傳改變，所述遺傳改變引起所述經(jīng)修飾的細(xì)胞與親本細(xì)胞相比產(chǎn)生增加量的Dpb3多肽，其中在相同發(fā)酵條件下與親本細(xì)胞產(chǎn)生的醇量相比所述經(jīng)修飾的細(xì)胞在發(fā)酵過程中產(chǎn)生增加量的醇。

2.如權(quán)利要求1所述的經(jīng)修飾的細(xì)胞，其中所述遺傳改變包括將核酸引入親本細(xì)胞中，所述核酸能夠指導(dǎo)Dpb3多肽以高于等同條件下生長的親本細(xì)胞的水平表達(dá)。

3.如權(quán)利要求1所述的經(jīng)修飾的細(xì)胞，其中所述遺傳改變包括引入用于表達(dá)Dpb3多肽的表達(dá)盒。

4.如權(quán)利要求1所述的經(jīng)修飾的細(xì)胞，其中所述遺傳改變包括引入外源YBR278w c基因。

5.如權(quán)利要求2所述的經(jīng)修飾的細(xì)胞，其中所述遺傳改變包括在內(nèi)源YBR278w c基因中引入更強(qiáng)的啟動子。

6.如權(quán)利要求1-5中任一項所述的經(jīng)修飾的細(xì)胞，其中與在等同條件下生長的親本細(xì)胞中的表達(dá)水平相比，Dpb3多肽表達(dá)的增加量為至少約30倍。

7.如權(quán)利要求1-5中任一項所述的經(jīng)修飾的細(xì)胞，其中與在等同條件下生長的親本細(xì)胞中的水平相比，產(chǎn)生的編碼Dpb3多肽的mRNA的增加量為至少約30倍。

8.如權(quán)利要求1-7中任一項所述的經(jīng)修飾的細(xì)胞，其進(jìn)一步包含YJL065c基因的破壞。

9.如權(quán)利要求1-8中任一項所述的經(jīng)修飾的細(xì)胞，其中所述細(xì)胞產(chǎn)生減少量的功能性Dls1多肽。

10.如權(quán)利要求1-9中任一項所述的經(jīng)修飾的細(xì)胞，其中所述細(xì)胞不產(chǎn)生Dls1多肽。

11.如權(quán)利要求1-10中任一項所述的經(jīng)修飾的細(xì)胞，其中所述細(xì)胞進(jìn)一步包含編碼碳水化合物加工酶的外源基因。

12.如權(quán)利要求1-11中任一項所述的經(jīng)修飾的細(xì)胞，其進(jìn)一步包含甘油途徑和/或乙酰輔酶A途徑中的改變。

13.如權(quán)利要求1-12中任一項所述的經(jīng)修飾的細(xì)胞，其進(jìn)一步包含用于制備乙醇的備選途徑。

14.如權(quán)利要求1-13中任一項所述的經(jīng)修飾的細(xì)胞，其中所述細(xì)胞屬于酵母屬物種(Saccharomyces spp.)。

15.一種用于增加生長于碳水化合物底物上的酵母細(xì)胞的醇生產(chǎn)的方法，所述方法包括：向親本酵母細(xì)胞中引入與親本細(xì)胞中產(chǎn)生的量相比使Dpb3多肽的產(chǎn)生增加的遺傳改變。

16.如權(quán)利要求15所述的方法，其中具有引入的遺傳改變的細(xì)胞是經(jīng)修飾的細(xì)胞，所述經(jīng)修飾的細(xì)胞是如權(quán)利要求1-15中任一項所述的細(xì)胞。

17.如權(quán)利要求15所述的方法，其中具有引入的使Dpb3多肽的產(chǎn)生增加的遺傳改變的細(xì)胞進(jìn)一步包含與親本細(xì)胞相比使產(chǎn)生的功能性Dls1多肽的量減少的遺傳改變。