[發(fā)明專利]用于確定細(xì)菌對(duì)抗生素或益菌劑的易感性的噬菌體介導(dǎo)的免疫分析和方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201880015017.0
• 申請(qǐng)日: 2018-01-02
• 公開（公告）號(hào): CN111601897A
• 公開（公告）日: 2020-08-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: A·貝倫基;D·A·斯科菲爾德
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 奎多公司;基德協(xié)會(huì)有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/04
• 分類號(hào): C12Q1/04;G01N33/569
• 代理公司: 北京坤瑞律師事務(wù)所 11494
• 代理人: 封新琴

1.一種用于鑒定樣品中細(xì)菌物種的方法，包括：

用經(jīng)轉(zhuǎn)化以表達(dá)異源蛋白質(zhì)標(biāo)志物的重組噬菌體孵育樣品以形成轉(zhuǎn)化的培養(yǎng)物，和測(cè)定所述轉(zhuǎn)化的培養(yǎng)物中異源蛋白質(zhì)標(biāo)志物的存在或不存在，其中所述標(biāo)志物的存在指示所述細(xì)菌物種的存在。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述噬菌體選自由裂解性噬菌體、溶原性噬菌體和絲狀噬菌體組成的組。

3.如權(quán)利要求2所述的方法，其中所述裂解性噬菌體選自由T4、T7、T3和MS2組成的組。

4.如權(quán)利要求2所述的方法，其中所述溶原性噬菌體是λ噬菌體。

5.如權(quán)利要求2所述的方法，其中所述絲狀噬菌體選自由fl、fd和M13組成的組。

6.如權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的方法，其中所述標(biāo)志物在所述細(xì)菌中可表達(dá)成核酸或蛋白質(zhì)。

7.如權(quán)利要求6所述的方法，其中所述標(biāo)志物可表達(dá)成選自由抗原、酶、抗體或其片段、和適體，或其組合組成的組的多肽。

8.如權(quán)利要求7所述的方法，其中所述蛋白質(zhì)標(biāo)志物包含可檢測(cè)的標(biāo)記。

9.如權(quán)利要求8所述的方法，其中所述蛋白質(zhì)標(biāo)志物用選自由熒光分析、化學(xué)發(fā)光分析、酶分析、凝膠電泳、免疫分析和配體結(jié)合分析組成的組的分析法進(jìn)行檢測(cè)。

10.如權(quán)利要求8所述的方法，其中所述蛋白質(zhì)標(biāo)志物用側(cè)流免疫分析進(jìn)行檢測(cè)。

11.如任何前述權(quán)利要求所述的方法，其中所述孵育還包括在抗微生物劑存在下的孵育，其中所述異源蛋白質(zhì)標(biāo)志物的表達(dá)指示對(duì)所述抗微生物劑的細(xì)菌抗性。

12.一種用于同時(shí)鑒定樣品中的細(xì)菌物種和確定其對(duì)抗微生物劑的易感性的方法，包括：

(a)在具有抗微生物劑的情況下培養(yǎng)樣品以產(chǎn)生原代培養(yǎng)物；

(b)在具有對(duì)細(xì)菌物種特異性且經(jīng)工程化以表達(dá)異源標(biāo)志物的轉(zhuǎn)化噬菌體的情況下培養(yǎng)所述原代培養(yǎng)物；和

(c)檢測(cè)所述標(biāo)志物的存在或不存在，其中所述標(biāo)志物的存在指示樣品中細(xì)菌物種的存在和其對(duì)抗微生物劑的抗性。

13.一種用于同時(shí)鑒定樣品中的細(xì)菌物種和確定其對(duì)抗微生物劑的易感性的方法，包括：

(a)在具有或不具有抗微生物劑的情況下培養(yǎng)等分的樣品以產(chǎn)生一組原代培養(yǎng)物；

(b)在具有或不具有對(duì)細(xì)菌物種特異性且經(jīng)工程化以表達(dá)異源標(biāo)志物的轉(zhuǎn)化噬菌體的情況下培養(yǎng)所述組的原代培養(yǎng)物的部分，從而產(chǎn)生多個(gè)轉(zhuǎn)化的次級(jí)培養(yǎng)物，其中第一轉(zhuǎn)化次級(jí)培養(yǎng)物包括在具有抗微生物劑的情況下培養(yǎng)的轉(zhuǎn)化細(xì)菌和第二轉(zhuǎn)化次級(jí)培養(yǎng)物包括不是在具有抗微生物劑的情況下培養(yǎng)的轉(zhuǎn)化細(xì)菌；和

(c)檢測(cè)所述異源標(biāo)志物的存在或不存在，其中所述標(biāo)志物的存在指示所述樣品中所述細(xì)菌物種的存在和其對(duì)所述抗微生物劑的抗性。

14.一種用于確定細(xì)菌對(duì)測(cè)試抗微生物劑的易感性的方法，包括：

(a)在抗微生物劑存在和不存在的情況下培養(yǎng)細(xì)菌以產(chǎn)生原代培養(yǎng)物；

(b)在對(duì)所述細(xì)菌特異性且包含標(biāo)志物的轉(zhuǎn)化噬菌體存在和不存在的情況下培養(yǎng)原代培養(yǎng)物，從而產(chǎn)生多個(gè)轉(zhuǎn)化的次級(jí)培養(yǎng)物，其中第一轉(zhuǎn)化次級(jí)培養(yǎng)物包括已經(jīng)用所述測(cè)試抗微生物劑處理的轉(zhuǎn)化細(xì)菌和第二轉(zhuǎn)化次級(jí)培養(yǎng)物包括未用所述抗微生物劑處理的轉(zhuǎn)化細(xì)菌；和

(c)檢測(cè)所述第一和第二轉(zhuǎn)化次級(jí)培養(yǎng)物各自的所述標(biāo)志物的水平或活性，從而確定所述細(xì)菌對(duì)所述抗微生物劑的易感性。

15.如權(quán)利要求14所述的方法，其中所述第一轉(zhuǎn)化次級(jí)培養(yǎng)物中所述標(biāo)志物的水平或活性與所述第二轉(zhuǎn)化次級(jí)培養(yǎng)物中所述標(biāo)志物的水平或活性相比的降低指示所述細(xì)菌對(duì)所述測(cè)試抗微生物劑是易感的。